5. Cấu trúc luận văn
2.2.8. Cách nạp mẫu vào cột [9]
Cĩ hai phương pháp nạp mẫu vào cột sắc kí là phương pháp khơ và phương pháp ướt.
a. Phương pháp khơ
Mẫu được nạp ở dạng khơ. Thường áp dụng cho trường hợp mẫu chất khơng tan hoặc tan kém trong dung mơi chạy cột ban đầu. Cách chuẩn bị mẫu: hồ tan hồn tồn mẫu trong dung mơi thích hợp, cho một lượng silicagel vừa đủ (lượng silicagel cho vào càng ít càng tốt, nhưng phải đủ để cĩ thể cơ quay mẫu được khơ hồn tồn) vào rồi đem cất quay đuổi dung mơi đến khơ hồn tồn. Lấy mẫu đã gắn đều trên silicagel ra, nghiền thành bột mịn. Cột sau khi nạp silicagel được điều chỉnh lượng dung mơi vừa đủ (đủ thấm ướt mẫu khơ cho vào). Cho mẫu vào cột qua phễu một cách từ từ để silicagel đã được gắn đều mẫu thấm đều dung mơi tránh tạo bọt khí và tránh để mẫu bị vĩn cục.
b. Phương pháp ướt
Thường áp dụng khi mẫu tan hồn tồn trong dung mơi chạy cột ban đầu. Lượng dung mơi dùng hồ tan mẫu càng ít càng tốt, vì lớp dung dịch này sẽ dàn trải một lớp mỏng trên cột. Cĩ thể áp dụng tính tốn cụ thể như sau: thể tích dung mơi cần lấy để hồ tan mẫu = 0,4.d2ml, với d là đường kính
trong của cột tính bằng mm. Mẫu được cho trực tiếp vào cột bằng ống hút mẫu (pipet). Cho mẫu chảy vào từ từ theo thành cột. Với phương pháp nạp mẫu này chúng ta cho dung mơi trong cột chảy xuống sát bề mặt silicagel trong cột rồi khố cột. Sau đĩ, mở khố để mẫu chảy xuống đến sát bề mặt silicagel. Cho từng lượng nhỏ dung mơi chạy cột vào để mẫu chảy qua bề mặt silicagel trong cột và rửa sạch thành cột rồi tiến hành chạy cột (để lớp mẫu chất chảy xuống được đồng đều).