5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
2.2.5. Phƣơng pháp thăm dò khả năng kháng vi sinh vật
a. Chuẩn bị dịch chiết
Tiến hành chƣng ninh 10 gam mẫu bột lá (bột hạt) chùm ngây trong 120 ml các dung môi: n-hexan, diclometan, etyl axetat, etanol ở nhiệt độ 49oC trong vòng 24 giờ. Sau chƣng ninh, lọc dịch chiết và cô quay còn 10 ml, thu đƣợc dịch chiết bột lá (bột hạt) chùm ngây trong các dung môi. Dịch chiết đƣợc thăm dò khả năng kháng vi sinh vật với hai chủng vi khuẩn Bacillus subtilis, vi khuẩn Escherichia coli bằng phƣơng pháp đục lỗ thạch.
b. Môi trường thạch dùng để thăm dò khả năng kháng vi sinh vật
Agar: 20.0 gam Pepton: 10.0 gam Cao thịt: 5.0 gam NaCl: 10.0 gam Nƣớc cất vừa đủ: 1000ml pH= 6.8; khử trùng ở 119o C trong 20 phút Tiến hành:
Cân chính xác 10.0 gam pepton, 5.0 gam cao thịt, 10.0 gam NaCl cho vào ca nhựa 2 lít, sau đó thêm nƣớc cất vừa đủ 1 lít. Điều chỉnh pH = 6.8 bằng máy đo pH rồi cho 20.0 gam Agar khuấy cho tan, sau đó nấu sôi bằng lo vi sóng. Sau khi nấu, hỗn hợp đƣợc cho vào bình tam giác 1 lít, nút bằng bông gòn và hấp khử trùng ở 119o
C trong 20 phút.
c. Xác định hoạt tính kháng vi sinh vật
Hoạt tính kháng vi sinh vật đƣợc xác định bằng phƣơng pháp đục lỗ. Phƣơng pháp nhƣ sau:
Môi trƣờng sau khi đƣợc pha và hấp khử trùng, cho vào mỗi đĩa petri có đáy phẳng đã đƣợc rửa sạch, sấy khô và đặt lên bề mặt thật phẳng để thạch có bề dày đồng nhất, khoảng 4 mm. Thể tích môi trƣờng khoảng 25 ml/ đĩa. Để nguội ở nhiệt độ phòng. Sau khi môi trƣờng đã đông cứng, tiến hành đục lỗ thạch. Sau đó, dùng que cấy trang vô khuẩn, trang đều khuẩn lên bề mặt thạch.
Dịch chiết đƣợc nhỏ vào các lỗ đã đục, sau đó mang các đĩa thạch giữ trong tủ ấm ở 37oC. Sau 24 giờ, quan sát vòng kháng khuẩn tạo thành.