Lần lặp lại Độ tro cao phía
Bắc (%)
Độ tro cao phía Nam (%)
1 5,61 5,37
2 5,60 5,34
3 5,47 5,36
Độ tro trung bình 5,56 5,36
Độ tro trung bình của cao tổng Bảy lá một hoa phía Bắc là 5,56% với SD = 0,078 và RSD = 0,014.
Độ tro trung bình của cao tổng Bảy lá một hoa phía Nam là 5,36% với SD = 0,015 và RSD = 0,003.
4.3.2. Định tính xác định hợp chất saponin trong cao tổng
4.3.2.1. Định tính saponin trong cao tổng bằng phản ứng hóa học
Hình 4.4 Phản ứng Liebermann - Burchard.
1: Báy lá một hoa phía Bắc, 2: Bảy lá một hoa phía Nam Ống A: ống trắng, Ống B: ống mẫu
Phản ứng Liebermann - Burchard xuất hiện vòng ngăn cách giữa 2 lớp có màu nâu đỏ nên cũng kết luận phản ứng cương tính.
1
A B A 2
28
Hình 4.5 Phản ứng tạo bọt.
1: Báy lá một hoa phía Bắc, 2: Bảy lá một hoa phía Nam Ống A: ống trắng, Ống B:ống mẫu
Phản ứng tạo bọt xuất hiện lớp bọt bền trên 30 phút nên kết luận phản ứng dương tính. Kết quả hai phản ứng dương tính trên chứng tỏ có sự hiện diện của saponin trong cao tổng của 2 loài Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam
4.3.2.2.Định tính saponin trong cao tổng bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng
Hình 4.6 SKLM hệ n-BuOH - AcOH - H2O (7 : 1: 2).
A: Báy lá một hoa phía Bắc, B: Bảy lá một hoa phía Nam 1: nguyên liệu, 2: cao tổng
A B
Rf = 0.52 Rf = 0.35 Rf = 0.62
29
Quan sát sắc ký đồ hệ dung môi n-BuOH - AcOH - H2O (7 : 1: 2) xuất hiện các vệt tím trên 2 bản sắc ký chứng tỏ trong cả 2 loài Bảy lá một hoa đều có sự hiện diện của saponin. Cả 2 loài đều có vệt tương đồng với Rf = 0,52. Tuy nhiên với vệt khác nhau có Rf = 0,62 của loài phía Bắc và Rf = 0,35 của loài phía Nam.
Hình 4.7 SKLM hệ CH2Cl2 - MeOH - AcOH (8 : 1: 1).
C: phía Bắc, D: phía Nam 1 : Nguyên liệu, 2 : Cao tổng
Quan sát sắc ký đồ hệ dung môi CH2Cl2 - MeOH - AcOH (8 : 1: 1) có các vết màu tím có giá trị Rf = 0,52 và Rf = 0,62 tương đồng giữa 2 loài Bảy lá một hoa chứng tỏ trong cả 2 loài Bảy lá một hoa đều có sự hiện diện của saponin.
4.3.3. Kết quả định lượng hàm lượng saponin trong cao tổng
Bảng 4.8 Kết quả định lượng hàm lượng saponin trong cao tổng Lần lặp lại Hàm lượng saponin
trong cao phía Bắc (%)
Hàm lượng saponin trong cao phía Nam (%)
1 59,68 65,33
2 59,72 65,30
3 59,22 65,07
Hàm lượng
saponin trung bình 59,54 ± 0,28 65,23 ± 0,14
Hàm lượng hợp chất saponin toàn phần trung bình có trong cao phía Bắc là 59,54% với SD = 0,28 và RSD = 0,005. Hàm lượng hợp chất saponin toàn phần trung
C D
1 2 1 2
Rf = 0,625 Rf = 0.52
30
bình có trong cao phía Nam là 65,23% với SD = 0,14 và RSD = 0,002. Hàm lượng saponin trung bình của cao tổng phía Bắc thấp hơn 5,69% so với hàm lượng saponin trung bình trong cao tổng phía Nam.
31
Chương V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận 5.1 Kết luận
Đã tiêu chuẩn hóa nguyên liệu: xác định độ tinh khiết của nguyên liệu, độ ẩm trung bình của 2 Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam lần lượt là 7,35% và 11,22%, độ tro trung bình toàn phần của 2 Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam lần lượt là 3,50% và 3,23%, độ tro không tan trong acid clohydric trung bình lần lượt là 0,65% và 0,38%. Định tính bằng phương pháp hóa học và phương pháp sắc ký lớp mỏng đều có sự hiện diện của hợp chất saponin trong nguyên liệu của 2 loài Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam. Hàm lượng saponin trong nguyên liệu của 2 Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam lần lượt là 6,71% và 6,92%. Hàm lượng saponin trong nguyên liệu phía Nam cao hơn 0,21%so với cao tổng phía Bắc.
Đã tiêu chuẩn hóa cao tổng: xác định độ tinh khiết của nguyên liệu, độ ẩm trung bình của 2 Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam lần lượt là 19,73% và 18%, độ tro trung bình toàn phần của 2 Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam lần lượt là 5,56% và 5,36%.Định tính bằng phương pháp hóa học và phương pháp sắc ký lớp mỏng đều có sự hiện diện của hợp chất saponin trong nguyên liệu của 2 loài Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam. Hàm lượng saponin trong cao của 2 Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam lần lượt là 59,54% và 65,23%. Hàm lượng saponin trong cao tổng phía Nam cao hơn 5,69% so với cao tổng phía Bắc.
5.2 Đề nghị
Khảo sát thành phần hóa học và định lượng các hợp chất hóa học của các loài Bảy lá một hoa khác ở Việt Nam.
Đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa của cao tổng và các cao phân đoạn của 2 loài Bảy lá một hoa phía Bắc và phía Nam.
Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn và khả năng gây độc của cao tổng và các cao phân đoạn lên các tế bào ung thư.
32
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
1. Ngô Văn Thu. 1990. Hóa học saponin. Nhà xuất bản Y học, Hà Nội, trang 3 - 15. 2. Đỗ Duy Bích và ctv. 2004. Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam. Tập II.
Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội, trang 256 - 258.
3. Nguyễn Kim Phi Phụng. 2007. Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ. Nhà xuất
bản Đại học Quốc gia, TP.HCM.
4. Viện dược liệu. 2003. Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam. Tập I. NXB KH & KT, Hà Nội, 182 - 184.
5. Bộ Y Tế. 2009. Dược điển Việt Nam.
6. Bộ môn Dược liệu. 2012. Phương pháp nghiên cứu dược liệu. Đại học Y Dược, Tp. Hồ Chí Minh.
7. Đỗ Tất Lợi. 2004. Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. NXB Y học, Tp. Hồ Chí Minh.
8. Trần Hùng và ctv 2014. Phương pháp nghiên cứu dược liệu. Đại học Y dược, Tp.Hồ Chí Minh.
9. Châu Thị Nhã Trúc, Lâm Bích Thảo, Trần Công Luận. 2015. Phân lập một số steroid từ loài bảy lá một hoa thu hái tại Kontum. Tạp chí Dược liệu, 20(2), tr.
82- 86.
10. Phạm Hoàng Hộ. 2000. Cây cỏ Việt Nam. Nhà xuất bản Trẻ.
Tiếng nước ngoài
11.Hisashi M., Yutana P., Toshio M., Akinobu K., Shinya K., Masayuki Y. 2003.
Protective Effects of Steroid Saponins from Paris polyphylla var. yunnanensis on Ethanol- or Indomethacin-Induced Gastric Mucosal Lesions in Rats: Structural Requirement for Activity and Mode of Action. Bioorganic & Medicinal Chemistry
Letters 13, 1101 - 1106.
12.Gao Lin-Lin, Li Fu-Rong, Jiao Peng et al. 2011.Apoptosis of human ovarian
cancer cells induced by Paris chinensis dioscin via a Ca2+ -mediated
mitochondrion pathway. Asian. Pac. J. Cancer. Prev. 12(5), pp. 1361.
13.Wang Y. 2007. Master thesis,Tianjin University, p.19
14.LuLu Y., Wen Y. G., Yan J. Z., Yu W.. 2008. A new phenylpropanoid glycosides
from Paris polyphylla var. yunnanensis. Fitoterapia 79, pp.306-307.
15.Ting Z., Hai L., Xue T. L., De-ran X., Xiao Q. C., Qiang W.. 2009. Qualitative
and quantitative analysis of steroidal saponins in crude extracts from Paris polyphylla var. yunnanensis and P. polyphylla var. chinensis by high
33
performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry. Journal of
Pharmaceutical and Biomedical Analysis 51, pp.114 - 124.
16.Li P. K., Yi X. L., Tolga E., Else D., He S. Y., Yang Z., Cheng Q. X., Chao L., Thomas E., Bai P. M. (2012). Polyhydroxylated Steroidal Glycosides from Paris
polyphylla. Journal of Natural Products, 75, pp. 1201-1205.
17.Li Fu-Rong, Jiao Peng, Yao Shu-Tong et al. 2012. Paris polyphylla Smith extract
induces apoptosis and activates cancer suppressor gene connexin 26 expression.
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 13(1), pp. 205-209.
18.Zhang Wenjie, Zhang Dian, Ma Xi et al. 2014. Paris saponin VII suppressed the
growth of human cervical cancer Hela cells. European Journal of Medical
Research, 19(1), pp. 1-7.
19.Wang Yuan Chuen, Yi Tsu Yi and Lin Kuei Hsiang. 2011. In vitro activity of Paris polyphylla Smith against enterovirus 71 and coxsackievirus B3 and its immune modulation. The American journal of Chinese medicine, 39(6), pp.
1219-1234.
20.Demicco E. G., Kavanagh K. T., Romieu-Mourez R., Wang X. B., Shin S. R., Landesman-Bollag E., Seldin D. C., Sonenshein G. E.. 2005. ReIB/p52 NFkappa
B complexes rescue an early delay in mammary gland development in transgenic mice with targeted superrepressor I kappa B-anpha expression and promote carcinogenensis of the mammary gland. Mol. Cell. Biol., 25, pp. 10136-10147.
21.Qin Xu-Jie, Yu Mu-Yuan , Ni Wei , Yan Huan , Chen Chang-Xiang , Cheng Yung-Chi , Li He, Liu Hai-Yang. 2016. Steroidal saponins from stems and leaves of Paris polyphylla var. yunnanensis. Phytochemistry, 121, pp. 20–29.
22.Wu Rong-Tsun, Lin Wey-Jing, Chiang Hsuch-Ching et al. 1990. Modulation of experimental autoimmune uveitis with formosanin-C in guinea pigs. Journal of
34
PHỤ LỤC Phụ lục 1 Số liệu cân mẫu xác định độ ẩm
Bảng 1.1 Độ ẩm nguyên liệu phía Bắc
Bảng 1.2 Độ ẩm nguyên liệu phía Nam
Bảng 1.3 Độ ẩm cao tổng phía Bắc
Bảng 1.4 Độ ẩm cao tổng phía Nam Lần lặp
lại
Khối lượng mẫu trước khi
sấy (g)
Khối lượng mẫu sau khi sấy
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0008 0,9251 0,9261 0,9265 2 1,0006 0,9259 0,9268 0,9271 3 1,0007 0,9268 0,9277 0,9280 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
sấy (g)
Khối lượng mẫu sau khi sấy
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0008 0,8898 0,8893 0,8889 2 1,0006 0,8884 0,8874 0,8871 3 1,0007 0,8885 0,8875 0,8872 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
sấy (g)
Khối lượng mẫu sau khi sấy
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0004 0,8042 0,8034 0,8033 2 1,0005 0,8048 0,8039 0,8035 3 1,0007 0,8038 0,8034 0,8031 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
sấy (g)
Khối lượng mẫu sau khi sấy
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0006 0,8128 0,8119 0,8118
35
Phụ lục 2 Số liệucân mẫu độ tro toàn phần
Bảng 2.1 Độ tro toàn phần nguyên liệu phía Bắc
Bảng 2.2 Độ tro toàn phần cao tổng phía Bắc
Bảng 2.3 Độ tro toàn phần nguyên liệu phía Nam
Bảng 2.4 Độ tro toàn phần cao tổng phía Nam
3 1,0007 0,8144 0,8134 0,8129
Lần lặp lại
Khối lượng mẫu trước khi
nung (g)
Tổng khối lượng sau khi nung
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0009 0,0359 0,0349 0,0347 2 1,0003 0,0354 0,0351 0,0350 3 1,0007 0,0364 0,0363 0,0359 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
nung (g)
Tổng khối lượng sau khi nung
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0004 0,0567 0,0563 0,0561 2 1,0002 0,0668 0,0562 0,0560 3 1,0003 0,0556 0,0549 0,0547 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
nung (g)
Khối lượng mẫu sau khi nung
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0008 0,0319 0,0314 0,0311
2 1,0002 0,0338 0,0331 0,0329
3 1,0007 0,0325 0,0323 0,0322
36
Phụ lục 3 Số liệu cân mẫu độ tro không tan trong acid
Bảng 3.1 Độ tro không tan trong acid nguyên liệu phía Bắc
Bảng 3.2 Độ tro không tan trong acid nguyên liệu phía Nam
Phụ lục 4 Số liệu cân mẫu định lượng saponin toàn phần
Bảng 4.1 Định lượng saponin toàn phần trong nguyên liệu phía Bắc lại mẫu trước khi
nung (g) 4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0002 0,0545 0,0538 0,0537 2 1,0001 0,0541 0,0537 0,0534 3 1,0002 0,0544 0,0539 0,0536 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
nung (g)
Khối lượng mẫu sau khi nung
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0009 0,0079 0,0074 0,0071 2 1,0003 0,0067 0,0061 0,0058 3 1,0007 0,0072 0,0068 0,0065 Lần lặp lại Khối lượng mẫu trước khi
nung (g)
Khối lượng mẫu sau khi nung
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 1,0002 0,0039 0,0038 0,0036 2 1,0003 0,0043 0,0041 0,0038 3 1,0001 0,0041 0,0039 0,0037 Lần lặp lại Khối lượng mẫu (g)
Khối lượng cắn saponin
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 5,0003 0,3142 0,3131 0,3129
2 5,0002 0,3042 0,3029 0,3028
37
Bảng 4.2 Định lượng saponin toàn phần trong nguyên liệu phía Nam
Bảng 4.3 Định lượng saponin toàn phần trong cao tổng phía Bắc
Bảng 4.4 Định lượng saponin toàn phần trong cao tổng phía Nam Lần lặp
lại
Khối lượng mẫu (g)
Khối lượng cắn saponin
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 5,0008 0,3118 0,3109 0,3105 2 5,0004 0,3157 0,3149 0,3146 3 5,0004 0,3088 0,3081 0,3076 Lần lặp lại Khối lượng mẫu (g)
Khối lượng cắn saponin
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 0,5004 0,2408 0,2399 0,2397 2 0,5008 0,2411 0,2403 0,2401 3 0,5006 0,2393 0,2384 0,2379 Lần lặp lại Khối lượng mẫu (g)
Khối lượng cắn saponin
4 giờ 2 giờ 2 giờ
1 0,5008 0,2695 0,2679 0,2678
2 0,5012 0,2691 0,2681 0,2677