Phần chiết etyl axetat (RJE) (25 g) được phân tách bằng sắc ký cột thường (CC) trên silica gel (Merck, 0,063-0,2 mm). Mẫu được đưa lên cột theo phương pháp tẩm mẫu trên silica gel. Rửa giải sắc ký với điclometan và hệ dung môi gradient điclometan- metanol 100:1, 20:1, 15:1, 10:1, 4:1 và 2:1 (v/v) cho 400 phân đoạn, mỗi phân đoạn 30 ml. Các phân đoạn có TLC giống nhau được gộp lại và cất loại dung môi dưới áp suất giảm cho 23 nhóm phân đoạn RJE1 (các phân đoạn 1- 19), RJE2 (20-31), RJE3 (32-39), RJE4 (40-48), RJE5 (49-51), RJE6 (52-80),
131), RJE12 (132-136), RJE13(137-149), RJE14 (150-160), RJE15 (161-168),
RJE16(169-190), RJE17(190-236), RJE18 (237-277), RJE19 (278-289),
RJE20(290-345), RJE21 (346-358), RJE22 (359-373), RJE23 (374-400).
Nhóm phân đoạn RJE1 (1,90 g) được rửa bằng metanol cho các tinh thể hình kim màu vàng RJE1 (0,37 g)
Nhóm phân đoạn RJE5 (0,86 g) được rửa bằng n-hexan hệ dung môi n-
hexan-axeton sau đó được kết tinh lại trong axeton cho chất vô định hình màu vàng nhạt RJE5 (13 mg)
Nhóm phân đoạn RJE7 (1,65 g) được rửa bằng n-hexan và hệ dung môi n- hexan-axeton sau đó được kết tinh lại trong axeton cho các tinh thể hình kim màu vàng RJE7 (0,51 g). Phân tích TLC cho thấy các tinh thể này là RJH4 đã được phân lập từ nhóm phân đoạn RJH4.
Nhóm phân đoạn RJE11 (1,50 g) được tinh chế trên silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải với hệ dung môi gradient n-hexan-axeton. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 3 nhóm phân đoạn từ RJE11.1
đến RJE11.3. Nhóm phân đoạn RJE11.2 (0,09 g) được rửa với dung điclometan cho các tinh thể hình kim màu vàng nhạt RJE11 (20 mg).
Nhóm phân đoạn RJE13 (0,52 g) được rửa bằng metanol sau đó được kết tinh lại trong điclometan cho tinh thể hình kim màu trắng RJE13 (20 mg).
Nhóm phân đoạn RJE14 (2,23 g) tinh chế trên silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải với hệ dung môi n-hexan-axeton 7:3. Dựa trên phân tích TLC các phân
đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 4 nhóm phân đoạn từ RJE14.1 đến
RJE14.4. Nhóm phân đoạn RJE14.3 (0,13 g) được rửa với dung môi etyl axetat cho tinh thể hình kim màu trắng RJE14 (50 mg).
Nhóm phân đoạn RJE18 (2,24 g) tinh chế trên silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải với hệ dung môi gradient điclometan-metanol. Dựa trên phân tích TLC các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 4 nhóm phân đoạn từ RJE18.1
đến RJE18.4. Nhóm phân đoạn RJE18.1 (0,06 g) được rửa với dung môi metanol sau đó được kết tinh lại trong hệ điclometan-metanol cho tinh thể hình kim màu vàng RJE18.1 (25 mg). Nhóm phân đoạn RJE18.2 (0,78 g) được rửa với dung môi metanol sau đó được kết tinh lại trong hệ điclometan-metanol cho tinh thể hình lá màu vàng đậm RJE18.2 (350 mg).
Nhóm phân đoạn RJE21 (3,76 g) tinh chế trên silica gel cỡ hạt 40-63 µm, rửa giải với hệ dung môi gradient điclometan-metanol. Dựa trên phân tích TLC, các phân đoạn có sắc kí đồ giống nhau được gộp lại cho 4 nhóm phân đoạn từ RJE21.1
đến RJE21.4. Nhóm phân đoạn RJE21.4 (3,07g) được rửa với dung môi etyl axetat cho tinh thể hình kim màu trắng RJE21 (1,35g).
Quá trình phân tách phần chiết etyl axetat được trình bày trong Sơ đồ 4.3, Mục 4.3.2., Chương 4: Kết quả và thảo luận.