3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.1 Quy trình cơng ngh
Dự kiến quá trình thu nhận dịch chiết lá sen:
Hình 3.1: Dự kiến quy trình đánh giá khả năng kháng vi sinh vật của dịch chiết lá sen
Thuyết minh quy trình
Nguyên liệu: Bột lá sen được thu nhận từ lá sen ở 3 độ tuổi (lá non, lá bánh
tẻ, lá già). Cách thức phân biệt và lựa chọn nguyên liệu lá sen tươi được mô tả Bột lá sen
Chiết với cồn
Chiết với
methanol ethyl acetateChiết với
Dịch chiết lá sen Cô quay chân khơng Pha lỗng nồng độ Đánh giá khả năng kháng vi sinh vật
trong mục 2.1. Lá sen tươi sau khi được thu hái sẽ trải qua các giai đoạn làm héo (28-30oC, độ ẩm đạt 60-62%), cắt nhỏ (1,5-2cm), sấy khô (60oC, độ ẩm đạt 5-7%) và cuối cùng là nghiền nhỏ (0,6-0,7mm) thu dạng bột lá sen. Ba loại bột lá sen theo 3 độ tuổi lá trên sẽ được tiến hành phân tích để chọn ra độ tuổi lá cho hàm lượng các hoạt chất sinh học cao nhất.
Thu nhận dịch chiết: Bằng cách sử dụng dung môi methanol, ethanol
hoặc ethyl acetate để chiết xuất, dịch chiết sau trích ly được tiến hành ly tâm tách bã, thu hồi dịch chiết. Sử dụng giấy lọc để thu nhận dịch chiết. Mục đích là để xác định ảnh hưởng của dung môi tới hiệu quả chiết xuất và lựa chọn dung môi tốt nhất.
Cô quay chân khơng: Nhằm mục đích loại bỏ dung mơi có trong dịch
chiết thu nhận được. Được tiến hành bằng máy cô quay chân khơng ở nhiệt độ 60oC, áp suất 1atm.
Pha lỗng nồng độ: Với mục đích đánh giá khả năng kháng vi sinh vật
của dịch chiết lá sen ở các nồng độ khác nhau, dịch chiết lá sen sau khi cô quay đuổi hết dung mơi, sẽ được tiến hành pha lỗng với nước cất ra các nồng độ khác nhau.
Đánh giá khả năng kháng vi sinh vật: Sau khi có dịch chiết đã được
pha loãng ra các nồng độ khác nhau, nhằm mục đích xác định đường kính vịng vơ khuẩn của dịch chiết lá sen, tiến hành đánh giá theo nguyên tắc dịch chiết lá sen được nhỏ vào các lỗ thạch trong môi trường nuôi cấy, dưới tác dụng của hoạt chất kháng khuẩn sẽ ức chế sự phát triển của vi sinh vật có sẵn trong mơi trường. Đo đường kính vịng vơ khuẩn, từ đó đưa ra kết luận về khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá sen.