3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.2. Bố trí thí nghiệm
Để nghiên cứu lựa chọn các điều kiện cơng nghệ thích hợp cho q trình chiết xuất, chúng tơi dựa trên ngun tắc: Khi nghiên cứu khảo sát 1 yếu tố nhất định thì thì các thí nghiệm đều được tiến hành ở cùng các điều kiện
công nghệ trừ yếu tố đang được khảo sát. Sau khi đã chọn được giá trị thích hợp của từng yếu tố thì các giá trị đó được cố định trong các thí nghiệm tiếp theo để khảo sát các yếu tố cịn lại.
Thí nghiệm 1: Xác định hàm lượng các hoạt chất của lá sen ở các độ tuổi
Nhằm mục đích xác định sự có mặt và hàm lượng của các hoạt chất quan trọng trong dịch chiết lá sen.
- Yếu tố phi thí nghiệm: Khối lượng mẫu, độ ẩm mẫu.
- Yếu tố thí nghiệm: Độ tuổi lá (lá non, lá bánh tẻ, lá già), lặp lại 3 lần. - Chỉ tiêu theo dõi: Hàm lượng các hoạt chất alkaloid, flavonoid, tannin,
saponin theo độ tuổi của lá sen.
Thí nghiệm 2: Xác định dung mơi chiết phù hợp
Dung mơi có ảnh hưởng đến hiệu suất và thời gian thu nhận dịch chiết. Để xác định ảnh hưởng của dung môi đến hiệu suất chiết xuất, chúng tôi tiến hành chiết xuất theo các hệ dung mơi khác nhau nhằm tìm ra một loại dung môi tạo ra hiệu suất chiết xuất cao nhất, tiết kiệm thời gian, chi phí.
- Yếu tố phi thí nghiệm: Độ tuổi lá là độ tuổi tối ưu tìm được từ thí nghiệm 1, khối lượng mẫu, độ ẩm mẫu.
- Yếu tố thí nghiệm: Dung mơi chiết xuất, có 3 loại đó là dung mơi cồn CH3CH2OH 95%, dung môi methanol 99,9% và dung môi ethyl acetate 99,9%; lặp lại 3 lần.
- Chỉ tiêu theo dõi: Hiệu suất chiết tính theo khối lượng cặn khơ.
Thí nghiệm 3: Xác định điều kiện nhiệt độ, thời gian chiết xuất.
Khả năng hoà tan của các chất trong dung môi phụ thuộc nhiều vào nhiệt độ và thời gian. Khi nhiệt độ và thời gian tăng, khả năng hồ tan các chất tăng. Vì thế, trong chiết xuất, người ta có xu hướng tăng nhiệt độ để giảm lượng dung mơi sử dụng và giảm thời gian chiết. Thí nghiệm nhằm mục đích tìm ra điều kiện chiết xuất tối ưu nhất mang lại hiệu suất chiết cao nhất.
- Yếu tố phi thí nghiệm: Độ tuổi lá là độ tuổi tối ưu tìm được từ thí nghiệm 1, dung mơi chiết xuất là loại dung mơi tìm được từ thí nghiệm 2,
khối lượng mẫu, độ ẩm mẫu.
- Yếu tố thí nghiệm: Nhiệt độ chiết xuất (20, 30, 40, 50, 60oC; nhiệt độ được ổn định bằng bể ổn nhiệt), thời gian chiết xuất (12, 24, 36, 48, 60h), thí nghiệm lặp lại 3 lần.
- Chỉ tiêu theo dõi: Hiệu suất chiết tính theo khối lượng cặn khơ.
Thí nghiệm 4: Xác định số lần chiết
Xác định số lần chiết mang lại hiệu suất thu hồi dịch chiết cao nhất. Số lần chiết ảnh hưởng đến hàm lượng các hoạt chất có trong dịch chiết thu hồi được, chiết càng nhiều lần thì hàm lượng các hoạt chất thu được càng lớn, tuy nhiên thì cần phải xem xét giữa hiệu quả chiết với lượng dung môi cần sử dụng để lựa chọn số lần chiết thích hợp.
- Yếu tố phi thí nghiệm: Độ tuổi lá là độ tuổi tối ưu tìm được từ thí nghiệm 1, dung mơi chiết xuất là loại dung mơi tìm được từ thí nghiệm 2, điều kiện chiết xuất là thời gian và nhiệt độ tìm được ở thí nghiệm 3, khối lượng mẫu, độ ẩm mẫu (5-7%).
- Yếu tố thí nghiệm: Chiết xuất 1, 2, 3 lần.
- Chỉ tiêu theo dõi: Hiệu suất chiết tính theo khối lượng cặn khơ.
Thí nghiệm 5: Xác định hiệu quả kháng khuẩn
Đánh giá về khả năng kháng vi sinh vật gây bệnh thực phẩm từ dịch chiết lá sen.
- Yếu tố phi thí nghiệm: Độ tuổi lá là độ tuổi tối ưu tìm được từ thí nghiệm 1, dung mơi chiết là dung mơi thu được từ thí nghiệm 2, điều kiện chiết xuất là nhiệt độ và thời gian cho hiệu quả tốt nhất từ thí nghiệm 3, số lần chiết tối ưu là kết quả từ thí nghiệm 4, khối lượng mẫu, độ ẩm mẫu.
- Yếu tố thí nghiệm: Các nồng độ dịch chiết (20, 40, 60, 80, 100%), 4 chủng vi sinh vật: E.coli, B.cereus, A.niger, P. italicum.
- Chỉ tiêu theo dõi: Đường kính vịng vơ khuẩn.