trắng bị gây suy giảm miễn dịch bằng CY
Sau 10 ngày, chuột ở hai nhóm bình thường và nhóm gây suy giảm miễn dịch được tách lấy gan, lách, tuyến ức, tuyến thượng thận để xác định trọng lượng tương đối của các cơ quan bằng công thức sau:
g % = Pcq /Pct * 100 Pcq: trọng lượng của cơ quan
Pct: trọng lượng cơ thể chuột tại thời điểm khảo sát
2.6.5. Khảo sát hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) trong gan sau khi gây suy giảm miễn dịch bằng cyclophosphamid
Sơđồ 2.2. Khảo sát hàm lượng MDA trong gan sau khi tiêm cyclophosphamid
Định lượng hàm lượng MDA trong gan
Tách gan chuột và nghiền đồng thể trong dung dịch đệm KCl 1,15 % theo tỉ lệ 1 : 10 (gan : dung dịch đệm) ở nhiệt độ 0 - 5 0C. Lấy 2 ml dịch đồng thể, thêm vào 1 ml dung dịch đệm Tris - HCl, ủ ở 37 0C trong 1 giờ. Kết thúc phản ứng bằng 1 ml acid tricloacetic 10 %, ly tâm 10000 vòng/phút, lấy 2 ml dịch trong cho phản ứng với 1 ml acid thiobarbituric 0,8 % ở 100 0C trong 15 phút và đo màu ở λ = 532 nm. [13]
2.6.6. Khảo sát tác dụng bảo vệ gan theo hướng chống gốc tự do qua việc định lượng malonyl dialdehyd (MDA) trong gan
Sau khi gây suy giảm miễn dịch và điều trị theo sơ đồ 2.3 , tiến hành định lượng hàm lượng MDA như phần 2.6.5.
Ngày 1 Cân trọng lượng Tiêm CY Định lượng MDA Định lượng MDA Định lượng MDA
Uống mẫu thử nghiệm (10 ml/kg)
Ngày 1 2 3 4 5 6 7 8
Cân trọng lượng và tiêm CY Cân trọng lượng và định lượng MDA
Sơđồ 2.3. Khảo sát tác dụng bảo vệ gan theo hướng chống gốc tự do.
2.6.7. Tính kết quả
Hàm lượng MDA (nM/ml) được tính theo phương trình hồi qui chất chuẩn MDA: y = 0,0637x - 0,0029 (R2 = 0,9981).
CnMMDA/ml dịch đồng thể = (ODthử + 0,0029)/0,0637.
Sau khi tính được hàm lượng MDA (nM/ml dịch đồng thể) ⇒ hàm lượng MDA (nM/g protid).