2. 1 Tình hìn hô nhiễm dầu trên thế giới:
3.2.4.Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của các chủng vi khuẩn:
Nhuộm Gram theo phƣơng pháp Hucker cải tiến [40].
Nguyên lý:
Dựa vào cấu trúc thành tế bào vi khuẩn để phát hiện các chủng vi khuẩn phân lập đƣợc thuộc nhóm Gr (+) hay Gr (-).
Tiến hành :
Nhỏ một giọt nƣớc vô trùng lên lam kính, dùng que cấy vô trùng lấy một ít sinh khối vi khuẩn hòa vào giọt nƣớc đó, dàn mỏng giọt huyền phù, hong khô và cố định vết bôi trên ngọn lửa đèn cồn. Nhuộm tiêu bản bằng dung dịch tím kết tinh ( crystal violet ) trong 1 phút, rửa bằng nƣớc cất, thấm khô, sau đó nhuộm tiếp bằng dung dịch lugol, để trong 1 phút. Đổ dung dịch lugol, rửa nhanh qua bằng cồn 96oC, rửa nƣớc, thấm nhẹ xung quanh vết bôi. Nhuộm tiếp với safranin 1 phút, rửa lại bằng nƣớc và để khô. Mẫu đƣợc quan sát bằng kính hiển vi quang học với độ phóng đại 100 lần dƣới vật kính dầu. Vi khuẩn Gr (-) bắt màu hồng, vi khuẩn Gr (+) bắt màu xanh đậm. Đối chứng cho vi khuẩn Gr(-) là E.coli bắt màu hồng và vi khuẩn Gr (+) là Bacillus bắt màu xanh đậm.
Phương pháp xác định hình thái tế bào trên kính hiển vi điện tử quét:
Các chủng vi sinh vật đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng dinh dƣỡng lỏng có chứa nguồn cơ chất thích hợp. Sau hai ngày tiến hành quan sát: Sinh khối đƣợc lọc qua giấy lọc vô trùng rồi đem ly tâm 5.000 vòng/phút trong 5 phút, rửa tách lấy tế bào. Tế bào vi khuẩn đƣợc hòa tan trong glutaraldehyt 2,5% trong đệm photphat natri 100 mM ( pH 7,2 )trong 30 phút. Lấy một giọt tế bào đã xử lý (106
- 108 tế bào/ml )đƣa lên 1 tấm phim mỏng và để 1 phút để cho mẫu bám đƣợc vào lƣới vàng. Rửa nhẹ nhàng với vài giọt nƣớc cất và mẫu đƣợc làm khô qua cồn 25, 50, 75 và 100%, chuyển qua T - butyl. Sau đó mẫu đƣợc làm khô bằng máy đông khô và phủ bằng vàng. Mẫu đƣợc quan sát dƣới kính hiển vi điện tử quét JEOL 5410 LV. Hình thái tế bào vi khuẩn đƣợc
chụp ảnh và đo kích thƣớc. Cố định mẫu và soi kính đƣợc thực hiện tại Viện 69, Bộ Tƣ lệnh Lăng.
* Tìm kiếm tập đoàn vi sinh vật và phân lập một số chủng vi khuẩn có
khả năng sử dụng dầu diesel được tuyển chọn sau 3 lần làm giàu dựa vào đặc điểm hình thái khuẩn lạc