2.2.7.1. Hình thức cảm quan
Thực hiện theo DĐVN III, phụ lục 1.1, trang PL-9. 2.2.7.2. Độ tan trong nước
Cân khoảng 1 g bột cao Diếp cá cho vào becher 250 ml. Thêm vào 100 ml nước cất. Khuấy thật kĩ cho tan. Để yên 15 phút và quan sát.
Nếu dung dịch đồng nhất: cao hơi tan trong nước.
Nếu dung dịch không đồng nhất: cao khó tan hoặc không tan trong nước. 2.2.7.3. Độ tan trong cồn
Cân khoảng 1 g bột cao Diếp cá cho vào becher 50 ml. Thêm vào 30 ml dung dịch cồn có độ cồn xác định. Khuấy thật kĩ cho tan. Để yên 15 phút và quan sát.
Nếu dung dịch đồng nhất: cao tan trong cồn có độ cồn xác định.
Nếu dung dịch không đồng nhất: cao khó tan hoặc không tan trong cồn có độ cồn xác định. Thử nghiệm với các dung dịch cồn có độ cồn thay đổi từ 10-96%.
2.2.7.4. Cắn không tan trong nước
Tiến hành: cân khoảng 1 g cao, hòa trong 50 ml nước cất trong cốc có mỏ. Lọc qua giấy lọc đã cân bì trước, sấy khô ở 100oC, để nguội 1 giờ trong bình hút ẩm. Cân, tính phần trăm cắn không tan trong nước so với khối lượng cao.
2.2.7.5. Độ ẩm
Thực hiện theo DĐVN III, phụ lục 9.6, trang PL-143. 2.2.7.6. Độ tro
Tro toàn phần
Thực hiện theo DĐVN III, phụ lục 7.6, trang PL-129, phương pháp 2.
Tro không tan trong acid
Thực hiện theo DĐVN III, phụ lục 7.5, trang PL-128.
Tro tan trong nước
Thực hiện theo DĐVN III, phụ lục 7.8, trang PL-129. 2.2.7.7. pH
Cân khoảng 1 g bột cao Diếp cá, hòa trong 200 ml nước cất đun sôi để nguội. Lọc, lấy dịch lọc, dùng dịch lọc để đo pH.
2.2.7.8. Kim loại nặng
Thực hiện theo DĐVN III, phụ lục 7.4.7, trang PL-126. 2.2.7.9. Định tính
Bằng phản ứng hóa học
Lấy khoảng 0,5 g bột cao Diếp cá, hòa trong 20 ml cồn 96%, đun nhẹ trên cách thủy cho tan, lọc và lấy dịch lọc chia ra 3 ống nghiệm và làm các phản ứng:
- Phản ứng với dung dịch NaOH 10%: nhỏ vài giọt thuốc thử NaOH 10% sẽ thấy dung dịch thử chuyển sang màu vàng sáng.
- Phản ứng với dung dịch FeCl3 5%: nhỏ vài giọt thuốc thử FeCl3 5% sẽ thấy dung dịch thử chuyển sang màu xanh dương.
- Phản ứng cyanidin (bột Mg kim loại + HClđđ, đun nóng): thêm vào dung dịch thử ít bột Mg và 3 giọt HClđđ, đun nóng trên cách thủy sẽ xuất hiện màu đỏ.
Bằng SKLM: đối chiếu với quercetin chuẩn
Bản mỏng: silica gel 60 F254 (Merck).
Hệ dung môi: toluene-chloroform-acetone (8:5:7).
Phát hiện: soi UV ở bước sóng 254 nm và phun dung dịch FeCl3 5% trong methanol. Tiến hành: chấm riêng biệt lên bản mỏng khoảng 20 µl mỗi dung dịch sau:
- Dung dịch chuẩn: lấy một ít tinh thể quercetin cho vào ống nghiệm nhỏ, thêm vài giọt methanol để hòa tan. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
- Dung dịch thử: chiết 1 g cao Diếp cá với 20 ml CHCl3 bằng siêu âm. Lọc, cô cách thủy làm đậm đặc dịch chiết.
Chuẩn bị dung dịch chuẩn và dung dịch thử như đã mô tả trong mục 2.2.5.2. Tiêm lần lượt các mẫu dung dịch chuẩn, dung dịch thử vào hệ thống HPLC, xác định diện tích đỉnh quercetin, rồi tính toán hàm lượng quercetin trong cao Diếp cá.
Hàm lượng phần trăm quercetin trong cao Diếp cá được tính theo công thức: 2 1 . . .100. % .100 . . .(100 ) c t t c C S m HLC X C S m a = −
Cc, Ct (µg/ ml): nồng độ pha dung dịch chuẩn và dung dịch thử Sc, St: diện tích đỉnh dung dịch chuẩn và dung dịch thử
m1 (g): khối lượng cao đem xử lý để được cắn chloroform. m2 (g): khối lượng cắn chloroform thu được
HLC: hàm lượng chuẩn đối chiếu quercetin a (%): độ ẩm
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU