2.5.4.1. Xác định khối lượng lá của các xuất xứ
- Tại khu khảo nghiệm: Xác định khối lượng lá của tất cả các xuất xứ ở tất cả 4 lặp. Khối lượng lá của mỗi ô xác định bằng cách: mỗi ô chia làm 3-5 nhóm tuỳ thuộc vào số lượng cây sống trong mỗi ô, lấy đường kính gốc làm cơ sở để phân chia, cự li giữa các nhóm được xác định bằng (Dmax- Dmin)/n (n là số nhóm trong mỗi ô) sau đó chọn cây trung bình về khối lượng lá căn cứ vào các chỉ
tiêu trung bình trong nhóm và quan sát thực tế hiện trường sau đó cắt cây trung bình, tuốt lá và cân.
- Tại khu quần thể nền chọn giống: cắt cây, ngắt lá và cân lá cho từng cây trong mỗi xuất xứ.
2.5.4.2. Xác định hàm lượng tinh dầu
Lấy mẫu lá để chưng cất tinh dầu
- Cho xuất xứ: Lấy cả cành có lá non, lá bánh tẻ và lá già- của tất cả các cây trong ô, đưa về phòng ngắt lá, bỏ cành, trộn đều, cân 4 mẫu lá tươi (lặp lại 3 lần), mỗi mẫu cân 200g lá trong đó 3 mẫu để xác định hàm lượng tinh dầu trong lá tươi còn một mẫu xác định độ ẩm.
- Với cây cá thể cũng lấy mẫu như lấy mẫu từng cây trong xuất xứ, cân 2 mẫu (lặp lại 2 lần), mỗi mẫu 200g lá
Xác định lượng lá khô tuyệt đối
Từ 200g mẫu lá tươi cho vào máy sấy, sấy ở chế độ nhiệt 1050C, mỗi lần sấy 3giờ sau đó bỏ ra đem để vào bình hút ẩm, cân mẫu rồi tiếp tục cho vào sấy. Làm như vậy cho đến khi khối lượng cân giữa lần sấy cuối cùng và lần sấy trước đó là như nhau.
Cất tinh dầu
Theo phương pháp lôi cuốn hơi nước trên thiết bị chưng cất tinh dầu có hồi lưu của Hiệp hội Dược phẩm châu Âu.
Các bước tiến hành như sau: cho lá vào bình cầu, đổ lượng nước xấp xỉ 1/2 thể tích bình chưng cất (không cần ngập nguyên liệu), cất cho đến khi số vạch ml tinh dầu không đổi thì dừng cất (khoảng 2 giờ), tinh dầu và nước được kéo lên qua sinh hàn làm lạnh, ngưng tụ lại cột cất phân đoạn có chia độ, đọc số ml tinh dầu nổi lên trên, tách tinh dầu và nước bằng ống hút và muối (Na2SO4).
Hàm lượng tinh dầu được xác định theo công thức:
- Hàm lượng tinh dầu trong lá tươi (HLt) được tính theo công thức HLt% =
Wt M.0,9.100
- 0.9 là khối lượng riêng của tinh dầu
- Wt là khối lượng lá tươi tính theo gram (g)
- Hàm lượng tinh dầu tính theo lá khô tuyệt đối (HLk) tính theo công thức HLk% = % ) 1 .( 100 100 %. HLt a HLt Trong đó: a = Wt Wk
Wt là tỷ lệ nước trong lá ( bao gồm cả tinh dầu) Wt: là khối lượng lá tươi
Wk: là khối lượng lá sau khi sấy ở nhiệt độ 105oC cho đến khi khối lượng không đổi.
ảnh 2.1. Chưng cất tinh dầu tại Ba Vì