Sử dụng Kit QIAprep Spin Miniprep (của hãng QIAGEN) và chỉ dẫn của nhà sản xuất để tách chiết plasmid. Đây là phương pháp tách plasmid lượng bé từ 1-1,5 ml dịch khuẩn E. coli, có số bản copy plasmid cao.
Quy trình: Hút 1,5 ml dịch khuẩn E.coli đã nuôi qua đêm trong môi trường LB lỏng cho vào ống eppendorf 1,5 ml. Ly tâm 7000 v/p trong 5 phút để thu tế bào. Hòa tan tế bào trong 250 l buffer P1 (lưu ý RNase đã được bổ sung vào buffer P1). Bổ sung 250 l buffer P2, đảo ống nhẹ nhàng 4 – 6 lần để trộn đều. Không votex, vì sẽ làm lẫn với DNA genome. Cần thiết có thể đảo ống cho đến khi nhìn thấy dịch trắng sữa. Không để phản ứng phân giải quá 5 phút. Bổ sung 350 l buffer N3, đảo ống ngay lập tức nhưng nhẹ nhàng 4- 6 lần. Tránh kết tủa cục bộ, đảo đều dung dịch nhẹ nhàng nhưng liên tục ngay sau khi bổ sung buffer N3. Dung dịch trở nên có màu trắng sữa. Ly tâm ở 13000 v/p trong 10 phút. Hút dịch nổi cho vào cột QIAprep Spin Miniprep. Ly tâm ở 13000 v/p trong 30- 60 giây, loại bỏ dịch chảy qua cột. Rửa cột QIAprep Spin Miniprep bằng cách bổ sung 0,5ml buffer PB và ly tâm ở 13000 v/p trong 30- 60 giây. Loại bỏ dịch chảy qua cột. Bước này là rất cần thiết để loại bỏ hoạt tính của nuclease khi sử dụng chủng endA+ như JM, HB101 hoặc các thế hệ khác của nó cũng như các chủng dại mà có mức độ hoạt tính cao của nuclease hoặc nồng độ carbonhydrate cao. Chủng tế bào chủ như XL-1 và DH5 không cần thiết phải sử dụng bước rửa này. Rửa cột QIAprep Spin Miniprrep bằng cách bổ sung 0,75 ml buffer PE và ly tâm ở 13000 v/p trong 30- 60 giây. Loại bỏ dịch chảy qua cột, và ly tâm bổ sung ở 13000 v/p trong 1 phút để loại bỏ hết buffer
rửa. Đặt cột trong một ống eppendorf 1,5 ml. Hòa tan DNA, bổ sung 50 l EB hoặc nước cất tới tâm của mỗi cột QIAprep Spin Miniprrep, để ở nhiệt độ phòng 1 phút và ly tâm ở 13000 v/p trong 1 phút. Tiến hành điện di kiểm tra sản phẩm tich sạch plasmid trên gel agarose 1%.