3.4.2.1 Phương pháp nghiên cứu ngoài thực địa
- Lựa chọn thời điểm và địa điểm khảo sát:
Thời điểm khảo sát, thu mẫu: khảo sát vào tháng 6/2014, tháng 8/2014 và tháng 4/2015.
Thời gian thu mẫu: Khảo sát LC chủ yếu vào chiều - tối, từ 16 giờ đến 23 giờ đêm; khảo sát BS tiến hành cả vào ban ngày (10h- 14 h, khi BS thường phơi mình tắm nắng) và chiều tối (khi BS đi ngày lên cây ngủ và BS đi đêm hoạt động).
Địa điểm khảo sát LC: Ban ngày, chọn những nơi ẩm ướt, nơi chúng thích sinh sống như ruộng, ao, hồ, vũng nước, khe suối, hang ẩm,trên các cành cây thấp ven sông suối, trong bụi cây không quá rậm, đám thực vật thủy sinh và phía dưới đá, các vật đổ nát trên mặt đất (lá mục, cây đổ...), đất ẩm, trong gốc cây mục, những chỗ quang đãng có nắng... ở các khu rừng nghiên cứu. Ban đêm, dùng đèn pin soi mọi địa hình và SC, đặc biệt là những nơi ẩm ướt nói trên để phát hiện mẫu. Các điểm để khảo sát BS cũng là mọi SC bắt gặp trong KVNC.
- Lập tuyến khảo sát: Căn cứ vào thảm thực vật và các yếu tố tự nhiên khác, chia khu vực khảo sát thành 4 nơi ở (nước, hang hốc- khe đất đá, trên mặt đất, trên cây), 4 HST theo mức độ tác động của con người, cảnh quan và trạng thái rừng (Khu DC- đất NN, Trảng cỏ- cây bụi, Rừng thứ sinh đang phục hồi, Rừng kín thường xanh). Các tuyến khảo sát được lập để thu mẫu và quan sát đều đi qua các HST và nơi ở trên.
- Ghi chép và thu thập dữ liệu: Thực hiện ghi chép ngay tại vị trí khảo sát gồm:
Ngày, giờ, địa danh (tên khe, suối...và tên thôn, xóm, xã), độ cao tuyệt đối, tọa độ điểm khảo sát
Mô tả môi trường sống: vật thể nơi tìm thấy mẫu (dưới thân cây gỗ, tán lá, bãi cỏ, trong hang đất, khe đá...), đặc điểm thực vật, chất nền như đá/ đám lá rụng... quanh vị trí đó.
Mô tả ngắn gọn về mẫu vật: hình thái sơ lược đáng chú ý, màu sắc tự nhiên, trạng thái của chúng khi bị bắt (kêu, hoạt động sinh sản, không hoạt động...).
- Thu thập mẫu vật: + Phát hiện mẫu:
Đi dọc suối, ven ao, hồ, ruộng nước... : quan sát bụi cây, cành cây vươn ra gần mặt nước, thảm lá mục, những hòn đá và tảng đá nhô lên trong lòng suối hoặc hai bên bờ suối, thân cây to trên tuyến đi.
Đi theo đường mòn trong rừng: Di chuyển chậm, nhẹ nhàng trên tuyến, hạn chế nói chuyện. Nghe và quan sát trên cành, lá, hốc cây, bụi cỏ để phát hiện mẫu qua tiếng kêu, tiếng động khi chúng di chuyển (như Cóc mắt bên Xenophrys major). Dùng gậy khua động nhẹ hoặc vạch tìm dưới lá cây, khe đá, vỏ cây và thân cây mục nằm dưới đất.
Ban đêm, dùng đèn pin để soi, phát hiện mắt LC (Ếch đồng
Hoplobatrachus rugulosus, Cóc mắt bên Xenophrys major, Ếch nhẽo Limnonectes kuhlii...).
+ Thu mẫu: Với LC, chủ yếu bắt bằng tay, đặt mẫu vào túi vải thoáng khí hoặc túi nilon thổi căng có vật tạo ẩm (giấy, thực vật- rong rêu ẩm ướt). Ếch cây màu xanh có khả năng tiết dịch có mùi hôi làm chết các ếch nhái khác nên đặt trong túi riêng.
Nhóm rắn, dùng gậy bắt, Thằn lằn có thể được bắt bằng tay vào ban ngày và nhất là buổi tối. Rắn, thằn lằn được đặt riêng trong các túi vải sâu.
Những mẫu quan sát hoặc thu được chụp ảnh, ghi chép đặc điểm màu sắc tự nhiên, tóm tắt hình thái, trạng thái khi bị bắt của chúng và xác định thời gian, độ cao, tọa độ điểm khảo sát (lưu số liệu vào máy). Bảo quản túi đựng LC, BS trong bóng râm, nơi mát mẻ, tránh ánh sáng chiếu trực tiếp.
+ Xử lí mẫu vật:
Gây mê bằng cách cho vào lọ đựng cồn, sau đó mang ra chụp ảnh để ghi lại màu sắc tự nhiên và hình dạng khi còn sống. Sau đó thả lại vào lọ để làm chết.
Đeo nhãn thực địa: Mỗi mẫu có 1 nhãn thực địa, trên đó ghi thông tin về số hiệu mẫu, thời gian (ngày) và địa điểm thu mẫu. Nhãn được ghi bằng bút chì hoặc bút bi mực dạng gel màu đen không bị mờ trong dung dịch định hình và bảo quản. Nhãn được đeo vào chân sau của LC, thằn lằn, rùa; vào cổ hoặc đút vào miệng với rắn.
Định hình mẫu: Các mẫu đều giữ hình dạng tự nhiên, tiêm bổ sung vào bụng, đùi với tiêu bản lớn, để mẫu vào hộp nhựa, tưới dung dịch định hình vào mảnh vải phủ phía trên. Với LC sử dụng cồn 700, bò sát sử dụng cồn 900, sau đó chuyển vào ngâm trong dung dịch bảo quản cồn 600 - 700 để trong phòng thí nghiệm để phân tích và phân loại.
- Phương pháp phỏng vấn:
+ Phỏng vấn để lựa chọn địa điểm khảo sát: phỏng vấn cán bộ của các cơ quan quản lí và chính quyền (trạm kiểm lâm, UBND xã) để nắm bắt được điều kiện tự nhiên cụ thể từng phần trong KVNC, trạng thái rừng, tác động của con người đến rừng, sông suối và LC, BS).
+ Đối tượng phỏng vấn chủ yếu là những người dân trong vùng, trực tiếp đi bắt ếch nhái, bò sát và tiếp xúc nhiều với rừng.
Nội dung nói chuyện quanh các vấn đề: những loài ếch nhái thường gặp trong vùng, những loài được dùng làm thực phẩm, để bán cùng giá trị kinh tế, di vật (sọ, mai rùa; rắn, tắc kè ngâm rượu...), mùa xuất hiện, nơi sống, địa điểm gặp mẫu trong vùng, thời gian hoạt động, mùa sinh sản- tập tính sinh sản, thức ăn, nơi ở, phương tiện- cách bắt mẫu, hoàn cảnh bị cắn và độc tính các loài rắn mà người dân trong vùng ghi nhận. Trong quá trình phỏng vấn có đưa ra bộ ảnh mầu chuẩn của loài để xác định được tên một số loài qua sự nhận biết đặc điểm bên ngoài. Sau đó, ghi chọn lọc những gì đã nghe được. Việc này được lặp đi lặp lại nhiều lần ở nhiều người. Tuy nhiên, do nhiều người dân vẫn có sự nhầm lẫn nên phương pháp này chủ yếu để nắm bắt thông tin những loài thường được săn bắt cho mục đích thương mại, làm thức ăn hoặc những loài đã được phát hiện khi cùng đi điều tra thực địa.
Với những người chuyên đi rừng săn bắt, mời họ dẫn đường, trên đường đi hỏi họ về những mẫu họ thu được, bán được bao nhiêu tiền, ở đâu, chỉ lại những địa điểm họ đã bắt mẫu trên đường đi khảo sát.
3.4.2.2 Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm
- Định loại mẫu vật: Trên cơ sở dữ liệu thu thập được trên thực địa và dữ liệu thu thập khi phân tích mẫu vật trong phòng thí nghiệm, định loại mẫu theo các tài liệu của René Bourret (1942 [34], 2009 [35], Đào Văn Tiến (1977, 1978, 1979, 1981) [25], [26], [27], [28], [29], Nguyễn Văn Sáng (2007) [23], Patrick David và đtg (2007) [37] và những tài liệu khác ...
- Phương pháp phân tích mẫu vật: Phân tích các đặc điểm hình thái của mẫu. Các hình 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8 minh họa cho một số đặc điểm hình thái và cách đo đếm mẫu LC, BS.
Hình 3.1 Số đo lưỡng cư không đuôi
1.Lỗ mũi; 2.Mắt; 3.Màng nhĩ; 4.Gờ sau mũi; 5.Mí mắt trên; 6.Rộng mí mắt trên; 7.Gian mi mắt; 8.Gian mũi; 9. Khoảng cách trước mắt; 10. Khoảng cách mút mõm- mũi; 11. Khoảng cách mút mõm- mắt; 13.Dài màng nhĩ; 14.Dài thân; 15.Rộng đầu; 16.Lỗ huyệt; 17.Dài đùi; 18.Dài ống chân; 19.Đùi; 20.Ống chân; 21.Cổ chân; 22.Dài củ bàn trong; 23.Dài bàn chân; 24.Đường kính đầu ngón chân IV
Hình 3.2 Tấm đầu của rắn
A. Nhìn trên; B. Nhìn bên; C. Nhìn dưới
F. Tấm trán; G. Vảy họng; In. Tấm gian mũi; T. Vảy thái dương; L. Tấm má; SL. Tấm mép trên; IL. Tấm mép dưới; V. Vảy bụng; M. Tấm cằm;
mõm; N. Tấm mũi; P. Tấm đỉnh; Pro. Tấm trước mắt; Pto. Tấm sau mắt;
Subo. Tấm dưới mắt
Hình 3.3 Các loại vảy lưng ở rắn
(Trần Kiên, Nguyễn Quốc Thắng, 1980)
a. Vảy lưng có gờ
b. Vảy lưng nhẵn
Hình 3.4 Cách đếm số hàng vảy thân
(Theo Manthey U. & Grossmann W., 1997)
a. Đếm xiên
b. Đếm theo hình chữ V
c. Đếm so le
Hình 3.5 Vảy bụng, vảy dưới đuôi và tấm hậu môn
(Theo Manthey U. & Grossmann W., 1997) SC: Vảy dưới đuôi;
Hình 3.6. Các tấm trên đầu ở thằn lằn (Mabuya)
(theo Manthey U. & Grossmann W., 1997)
1. Trán; 2. Trước trán; 3. Trán - mũi; 4. Mũi; 5. Trên mũi; 6. Mõm; 7.
Má; 8. Sau mũi; 9. Trên ổ mắt; 10. Trán đỉnh; 11. Gian đỉnh; 12. Đỉnh;
13. Gáy; 14. Trước ổ mắt; 15. Trên mi; 16. Mép trên; 17. Cằm; 18. Sau cằm; 19. Mép dưới; 20. Thái dương; 21. Họng; 22. Màng nhĩ.
Hình 3.7. Lỗ tai thằn lằn (theo Bourret R., 1943)
a. Gekko gecko (lỗ tai dài và sâu); b. Mabuya longicaudata (lỗ tai tròn và sâu); c. Tropidophorus bermorei (màng nhĩ nông); d. Lygosoma quadrupes
(lỗ tai rất nhỏ); e. Dibamus bourreti (tai và mắt ẩn dưới vảy).
a. Gekko gecko (không có mí động); b. Lygosoma quadrupes (mí dưới có vảy);
c. Mabuya longicaudata (mí dưới có vảy lớn, trong suốt); d. Emoia laobaoensis (mí dưới có 1 đĩa lớn trong suốt).
3.4.2.3 Phương pháp kế thừa
Sưu tầm các tài liệu công bố về LC, BS ở khu vực nghiên cứu, ở Việt Nam và các nước xung quanh như Trung Quốc, Lào…
3.4.2.4 Phương pháp xử lí số liệu
Chương 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN