3. Nội dung nghiên cứu
2.2.4. Phương pháp nuơi cấy in vitro
- Phương pháp lấy mẫu: Cây được lựa chọn để lấy mẫu là những cây sinh trưởng khoẻ khơng bị sâu .
Tạo nguồn vật liệu ban đầu
+ Rửa mẫu (hạt, lá, củ) nhiều lần bằng nước sạch, tránh làm dập mẫu. + Ngâm trong nước xà phịng lỗng 1% khoảng 5 - 7 phút.
+ Tiếp tục rửa mẫu bằng nước sạch nhiều lần
+ Chuyển mẫu vào bình tam giác và tráng lại nhiều lần bằng nước cất vơ trùng trước khi khử trùng với hĩa chất.
Thí nghiệm 3. Khử trùng hạt bằng 3 loại hĩa chất
CT 1: Javen nồng độ 65% trong 15 phút và 75% trong 10 phút.
CT 2: HgCl2 nồng độ 0,1% trong 5 phút, 8 phút.
CT 3: Khí clo (HCl và javen theo tỉ lệ 4 : 20ml) trong 16 giờ.
Thí nghiệm 4. Khử trùng củ bằng cách kết hợp cồn, javen và HgCl2
CT 1: cồn 70% trong 3 phút sau đĩ sử dụng javen 7% trong 3phút, tiếp
đến dùng HgCl2 0,1% trong 4 phút.
CT 2: cồn 70% trong 3 phút, sau đĩ sử dụng javen 7% trong 5 phút tiếp
CT 3: cồn 70% trong 3 phút sau đĩ sử dụng javen7% trong 7 phút tiếp
đến dùng HgCl2 0,1% trong 6 phút.
CT 4: cồn 70% trong 3 phút sau đĩ sử dụng javen 7% trong 9 phút tiếp
đến dùng HgCl2 0,1% trong 8 phút.
Thí nghiệm 5. Khử trùng lá bằng:
Cơng thức 1: javen 7% trong 10 phút Cơng thức 2: javen 7% trong 15 phút.
Cơng thức 3: cồn 70% trong 1 phút sau đĩ sử dụng javen 20% 10 phút tiếp
đến dùng HgCl2 0,1% trong 5 phút.
Nhân nhanh chồi cây Thất diệp nhất chi hoa
Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng của GA3 đến sự nảy mầm của hạt.
Hạt cấy trên mơi trường MS cĩ bổ sung GA3 nồng độ từ 0,3 đến 1,9 mg/l, mỗi bậc cách nhau 0,2mg/l.
Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng của BAP đến sự nảy mầm của hạt
Hạt cấy trên mơi trường MS cĩ bổ sung BAP nồng độ từ 1,0 đến 5mg/l, mỗi bậc cách nhau 0,5ml.
Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng của các ĐHST đến sự phát sinh hình thái của lá Hạt cấy trên mơi trường MS cĩ bổ sung
Cơng thức 1: 2,4-D nồng độ từ 1,0 đến 4 mg/l bước nhảy 0,5mg/l. Cơng thức 2: BAP nồng độ từ 1,0 đến 4mg/l bước nhảy 0,5mg/l. Cơng thức 3: IBA nồng độ từ 1,0 đến 4mg/l bước nhảy 0,5mg/l.
Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng của các chất ĐHST đến sự phát sinh hình thái của tế bào lớp mỏng
Củ của cây Thất diệp nhất chi hoa sau khi khử trùng được cắt thành từng lát mỏng theo kích thước khoảng 0,5 x 1cm dày khoảng 0,2cm và được cấy trên mơi trường MS cơ bản cĩ bổ sung :
Cơng thức 1: IBA nồng độ từ 0,2 đến 1,4 bước nhảy 0,2 mg/l Cơng thức 2: 2,4-D nồng độ từ 0,2 đến 1,4 bước nhảy 0,2 mg/l
Thí nghiệm 10: Ảnh hưởng của các ĐHST đến sự phát sinh hình thái của củ.
Cơng thức 1: MS cơ bản
Cơng thức 2: MS + BAP (0; 0,5; 1; 2 mg/l)
Cơng thức 3: MS + BAP (0; 0,5; 1 mg/l) + than hoạt tính.