1.3.2.1. Phương pháp ELISA trực tiếp (Direct ELISA)
Thường dùng để phát hiện kháng nguyên [31].
Kháng nguyên được gắn lên pha rắn và được xác định trực tiếp bằng phản ứng kết hợp đặc hiệu với kháng thể tương ứng đã được gắn enzym và thông qua phản ứng lên màu của cơ chất.
Hình 1.6. Kỹ thuật ELISA trực tiếp
1.3.2.2. Phương pháp ELISA gián tiếp (Indirect ELISA)
Khác với kỹ thuật ELISA gián tiếp, kháng nguyên gắn lên pha rắn được xác định thông qua hai yếu tố phát hiện: đầu tiên là kháng thể tương ứng (kháng thể sơ cấp) kết hợp đặc hiệu với kháng nguyên; sau đó là sự kết hợp đặc hiệu của kháng thể đó với kháng kháng thể gắn enzyme (kháng thể thứ cấp) thông qua phản ứng lên màu của cơ chất. Kháng thể thứ cấp có thể là kháng kháng thể hoặc Protein A [31].
1.3.2.3.Phương pháp ELISA Sandwich (Sandwich ELISA)
Hình 1.8. Kỹ thuật ELISA Sandwich trực tiếp
Hình 1.9. Kỹ thuật ELISA Sandwich gián tiếp
Sau khi kháng nguyên (yếu tố cần xác định) bị kẹp giữa (liên kết) hai kháng thể: Kháng thể bắt giữ và kháng thể phát hiện, lúc này phương pháp quay lại tương tự như phương pháp ELISA trực tiếp hay gián tiếp [31].
1.3.2.4. Phương pháp cạnh tranh (Competitive ELISA)
Kỹ thuật ELISA cạnh tranh rất hiệu quả cho việc định lượng với hàm lượng kháng nguyên trong mẫu với lượng nhỏ. ELISA cạnh tranh sử dụng một lượng kháng nguyên cùng loại được gắn enzyme (kháng nguyên cạnh tranh) với kháng nguyên cần định lượng trong mẫu. Phản ứng kết hợp đặc hiệu kháng nguyên với kháng thể tương ứng đã được cố định trên pha rắn xảy ra. Ở đây có sự cạnh tranh giữa hai loại kháng nguyên để kết hợp đặc hiệu với kháng thể. Đo lượng kháng nguyên cạnh tranh này thông qua phản ứng thủy phân lên màu cơ chất bởi enzyme được liên kết với nó. Kháng nguyên cạnh tranh càng hiện diện nhiều thì kháng nguyên cần xác định trong mẫu càng ít và ngược lại [31].