III. Công nghệ sản xuất thuốc trừ sâu sinh học B.thuringiensis
3.3.2. Lên men TC2.5 tạo chế phẩm
Sau khi nghiên cứu sơ bộ các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình lên men tiến hành lên men sản xuất tạo chế phẩm trong điều kiện PH=7, nhiệt độ: 30oC, lắc ở 200 vòng/phút trong thời gian 72 giờ. Sau khi kết thúc lên men thu sinh khối và đặt trong tủ âm rồi tiến hành đông khô, thu được chế phẩm dạng bột.
Hình 3.4. Chế phẩm Bt dạng bột sau khi lên men.
3.3.3. Thử nghiệm hoạt tính diệt sâu tơ của chế phẩm Bt – TC2.5
Để đánh giá hoạt tính sinh học của chế phẩm Bt-TC 2.5 chúng tôi đã tiến hành thí nghiệm thử hoạt tính diệt sâu tơ của chế phẩm Các thí nghiệm được tiến
hành trong cùng một điều kiện nhiệt độ, ánh sáng thông thường, bố trí thí nghiệm được trình bày trong chương 2. (Vật liệu và phương pháp nghiên cứu).
Quá quá trình thử hoạt tính cho thấy, 100% sâu chết sau 3 ngày nghiên
cứu sau khi ăn lá cây có chứa chế phẩm BT- TC2.5. Như vậy, chủng TC2.5 sau
khi lên men tạo chế phẩm ở các điều kiện như trên vẫn giữ được hoạt tính diệt
(A): Sâu tơ chết do ăn lá cây được tẩm dịch chế phẩm Bt – TC25
(B): Sâu tơ vẫn còn sống ở lô đối chứng dương với lá cây ngâm trong nuớc cất
Hình 3.5. Thử hoạt tính diệt sâu tơ với chế phẩm Bt-TC2.5 sau 3 ngày thí nghiệm
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. Kết luận
1) Đã thử nghiệm hoạt tính diệt sâu của 5 chủng Bt var. kustaki. Kết quả cho thấy, ở nồng độ 107 bào tử/ml thì hoạt tính diệt sâu là rất cao trong đó chủng TC 2.5 có khả năng diệt 100% sâu thử nghiệm ngay ở nồng độ 105. Chủng TC 2.5 được lựa chọn để lên men tạo chế phẩm diệt sâu tơ.
2), Đã xác định được khoảng nhiệt độ 28±1oC và độ pH từ 6,5 – 7,5 thích hợp cho lên men chế phẩn Bt thử nghiệm. .
3) Đã thành công trong việc tạo ra chế phẩm Bt-TC2.5 có hoạt tính diệt sâu tơ cao.
2. Kiến nghị
Tiếp tục nghiên cứu sâu hơn chủng TC 2.5 và tối ưu hoá quy trình lên men sản xuất chế phẩm Bt ở quy mô công nghiệp.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu Tiếng Việt
1. Đái Duy Ban (2006), Công nghệ gen, Nhà xuất bản khoa học và kỹ thuật. 2. Ngô Đình Bính, Nguyễn Quang Châu, Nguyễn Ánh Nguyệt (2002), Thu nhận huyết thanh miễn dịch cho phân loại Bacillus thuringiensis, Kỷ yếu 2001 -2002, Viện Công nghệ Sinh học, trang 296 – 302.
3. Ngô Đình Bính (2005),Giáo trình thuốc trừ sâu sinh học.
4. Nguyễn Xuân Cảnh, Nguyễn Ánh Nguyệt, Nguyễn Thanh Hạnh, Nguyễn Quỳnh Châu, Ngô Đình Bính (2004), Nghiên cứu sự đa dạng sinh học của vi khuẩn Bacillus thuringiensis ở Việt Nam. Báo cáo khoa học, nghiên cứu cơ bản trong Khoa học sự sống định hướng Nông lâm nghệp miền núi, Thái Nguyên 2004, NXB KHKT. trang 59 – 62.
5. Nguyễn Lân Dũng (1981), Sử dụng vi sinh vật để phòng trừ sâu hại cây trồng, NXB KHKT
6. Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2003), Vi sinh vật học, NXB giáo dục.
7. Hoàng Thị Lợi (2003), Giáo trình côn trùng học nông nghiệp tập 2, NXB Nông nghiệp Hà Nội, trang 122 – 167.
8. Phan Cự Nhân, Nguyễn Minh Công, Đặng Hữu Lanh. Di truyền học, tập 1,
NXB Đại học Sư Phạm, trang 49 – 53.
9. Khuất Hữu thanh ( 2003), Cơ sở di truyền phân tử và kỹ thuật gen.
NXBKHKT. Trang137 – 140, 206 – 210.
10. Đặng Trọng Lương, Vũ Đức Quang, Nguyễn Hữu Đống, Trần Duy Quý (1999), Thiết kế lại cấu trúc gen Bt để chuyển vào cây hai lá mầm, Báo cáo Hội nghị sinh học toàn quốc, trang 1371-1376.
Tài liệu Tiếng Anh
11. Attathom T, Chanpaisang J, and Hongrattanameteekul W. Bacillus thuringiensis Isolation, Indentification, and Bioasay. 1994. In Bacillus
thuringiensis, Biotechology and Environmental Benefits, pp70 – 86.
12. Barjac D H and Bonnefoi A (1962), Essai de classification biochimique et serologique de 24 souches de Bacillus du type B. Bacillus thuringiensis.
Entomophaga, 7, pp 5 – 31.
13. Barjac D H (1981), Identification of H- serotypes of Bacillus thuringiensis. 36 – 42 Burges H.D. (edited), In microbial control of pests and plant Diseasis 1970 – 1980.
14. Barjac D H & Frachon E (1990), Classification of Bacillus thuringiensis
strains, Entomophaga 35, pp 233 – 240.
16. Cheng X Y, Sardana R, Kaplan H et al. (1998), Agrobacterium transformed rice plants expressing synthetic cryIA(b) and cryIA(c) genes are highly toxic to striped stem borer and yellow stem borer. Pp: 154-172.
17. Chicott, C. N., Wigley, P. J. 1993. Insecticidal activity of Bacillus
thuringiensis crytal protein. Proceedings of the 2nd Canberra Bacillus
thuringiensis meeting. P. 43-52.
17. Dams. A, L.F., T.E Visick, ADN H.R.Whiteley (1989), A20 – Kilodaltonprotein is required for efficient production of the Bacillus thuringiensis var. israelensis 27 – Kilodalton crystal protein in E. coli. J.
Bacteriol. 171, pp 521 – 5 30.
18. Didier, L.D.. Ameller, ADN M.Marguerite (1993), Lecadet Diverst ty of
Bacillus thuringiensis toxin ADN Genes. Pp 34 -45.
19. Dwu, XL. Cao, Y.Y Bai, ADN AI. Aronson (1991), Sequensing of an operon containing a novel δ-endotoxin gene from Bacillus thuringiensis.
FEMS microbial. Lett. 81 – 31.
toxin and genes (1993), In Bacillus thuringiensis an environmental pesticide Theory and Practice. Dited by P. F. Entwistle, J. S. Cory, M. J. Bailey and S. Higgs, pp 37 – 60.
21. Federici, B.A., Park, H.W. & Bideshi, D.K. 2010. Overview of the Basic Biology of Bacillus thuringiensis with Emphasis on Genetic Engineering of Bacterial Larvicides for Mosquito Control. The Open Toxinology Journal., 3, 83-100.
22. Frankenhuyzen V K. The challenge of Bacillus thuringiensis. In Bacillus
thuringiensis an environmental pesticide: Theory and Practice. Edited by
P. F. Entwistle, J. S. Cory, M. J. Bailey and S. Higgs 1993, pp 1 – 23. 23. http://www.thainguyen.gov.vn
24. http://www.en.wikipedia.org/wiki/Lepidoptera # cite_note-cgillott-5 25. J. Li, D. J. Derbyshire, B. Promdonkoyt and D. J. Ellart (2001), Structural
- endotoxin fromimplicatios for ransformation of Bacillus
thuringiensis.water –soluble to membrane –inserted forms, Biochemical
Society: pp 571- 577.
26. Http: //web.utk.edu
27. Navon, A (2000), Bacillus thuringiensis insecticides in crop protection- reality and prospects, Crop Protection,19, pp 669-676.
28. Lacey, L.A., Frutos, R., Kaya, H.K. & Vail, P (2001), Insect pathogens as biological control agents: Do they have a future? Biological Control, 21, pp: 230-248.
29. Bauce, E., Carisey, N., Dupont, A. & van Frankenhuyzen (2004), Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki aerial spray prescriptions for balsam fir stand protection against spruce.pp: 621-630.
30. Crickmore (2006), Beyond the spore - past and future developments of
Bacillus thuringiensis as a biopesticide. Journal of Applied Microbiology,
31. Hernstadt, C., Soares, G.G., Wilcox, E.R. & Edwards, D.L (1986), A new strain of Bacillus thuringiensis with activity against coleopteran insects.
Bio/Technology, 4, pp 305-308.
32. Barton, K.A., Whiteley, H.R. & Yang, N.S. (1987). Bacillus thuringiensis
delta-endotoxin expressed in transgenic Nicotiana tabacum provides resistance to Lepidopteran insects. Plant Physiology, 85, pp:1103-1109. 32. Perlak, F.J., Deaton, R.W., Armstrong, T.A., Fuchs, R.L., Sims, S.R.,
Greenplate, J.T. & Fischhoff, D.A (1990) Insect resistant cotton plants.
Bio-Technology, 8, 939-943.
33. Fujimoto, H., Itoh, K., Yamamoto, M., Kyozuka, J. & Shimamoto (1993), Insect resistant rice generated by introduction of a modified delta- endotoxin gene of Bacillus thuringiensis. Bio-Technology, 11, pp 1151- 1155.
34. Yezza A., Tyagi R. D., Valero J. R. and Surampalli R. Y. (2005) Bioconversion of industrial wastewater and wastewater sludge in Bacillus Thuringiensis based biopesticides in pilot fermentor, Bioresource Technology. 97, pp. 1850-1857.
35. Yu, H.Y., Li, Y.H. & Ming Wu, K.M ( 2011), Risk Assessment and Ecological Effects of Transgenic Bacillus thuringiensis Crops on Non- Target Organisms. Journal of Integrative Plant Biology, 53, pp 520–538.
36. James, C. 2010. Global Status of Commercialized Biotech/GM Crops (2010), ISAAA Briefs.
37. James, C (2013), Global status of commercialized biotech/GM crops: 2013.
ISAAA Briefs.
38. Capinera, J.L ( 2001), Handbook of Vegetable Pests. Academic Press pp 729.