Đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân là một phương pháp hiện đại và thường được sử dụng để xác định cấu trúc phức tạp của các hợp chất thiên nhiên. Qua đánh giá kết quả sắc ký bản mỏng bao gồm: giá trị Rf chất C2 bằng giá trị Rf của quercetin chuẩn, thuốc nhuộm vanillin và thuốc thử AlCl3 chỉ thị sự có mặt của nhóm chức flavonoids, chúng tôi định hướng chất C2 là một chất có tính chất tương tự quercetin. Vì vậy, chúng tôi tiến hành đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 1H-NMR của quercetin chuẩn và chất C2, kết quả được thể hiện trong hình 3.5 và hình 3.6.
Hình 3.5. Phổ 1H-NMR của quercetin chuẩn
Phổ này cho thấy ba loại tín hiệu proton: proton nhân thơm, tín hiệu proton hydroxyl của chất phân tích và tín hiệu proton của dung môi. Cấu trúc khung của flavonol là một flavon được thay thế ở vị 3 trên benzopyrone với một nhóm hydroxyl, làm cho nó trở thành một 3-hydroxyflavone. Hai proton thơm tại vị trí màu xanh da trời và đỏ, xuất hiện dưới dạng cấu trúc kép lần lượt ở mức 6,8 và 6,6 ppm, sự nhân đôi
phát sinh từ khớp nối xa trên hệ thống nhân thơm. Các proton tại vị trí màu hồng (5,53 ppm) và xanh lá cây (5,30 ppm) xuất hiện dưới dạng một cặp đôi và là các tín hiệu riêng vì có sự tách tín hiệu ở các khớp nối. Trong khi proton tại vị trí màu đen, cặp đôi với proton lân cận ở vị trí màu xanh da trời xuất hiện dưới dạng một tín hiệu đôi tại trung tâm ở 6,01 ppm. Các proton hydroxyl xuất hiện riêng rẽ với tín hiệu ở bến trái của phổ tại các giá trị 9,92, 8,72, 8,48 và 8,43,
Hình 3.6. Phổ 1H-NMR của C2
Phổ 1H-NMR của chất C2 cũng cho thấy sự xuất hiện của proton hydroxyl, proton nhân thơm và proton từ dung môi. Các giá trị phổ của chất C2 và chất chuẩn quercetin được so sánh trong bảng kết quả 3.4:
Bảng 3.4. Bảng so sánh giá trị peak của quercetin chuẩn với chất C2
1H NMR STT Quercetin_St C2 ppm 1 11,613 12,441 2 9,928 9,911 3 8,729 4 8,482 5 N/A 7,672
6 N/A 7,54 7 N/A 7,536 8 N/A 6,933 9 6,800~6,794 6,899 10 6,676 6,881 11 6,673~6,652 6,863 12 N/A 6,452 13 N/A 6,394 14 N/A 6,39 15 6,019~6,018 6,173 16 6,003~6,000 5,971 17 5,536~5,531 5,529 18 5,316~5,309 5,279 19 N/A 3,828 20 N/A 3,484 21 N/A 2,729 22 2,497 2,49 23 N/A 2,141 24 N/A 1,975 25 1,626 1,62 26 N/A 1,452 27 N/A 1,177 28 N/A 0,889 29 N/A 0,817
Chú thích: N/A là không tồn tại
Từ bảng so sánh 3.4 có thể thấy, các tín hiệu proton thu nhận được của chất C2 tương đồng với các tín hiệu đo được của quercetin chuẩn. Các tín hiệu chính thể hiện sự có mặt của các proton nhân thơm bao gồm tín hiệu 6,800~6,793 ppm đến 5,316- 5,309 đều quan sát được trong phổ đồ của chất C2. Ngoài ra, trong phổ đồ của chất C2
còn xuất hiện một số tín hiệu nhiễu. Vì quá trình tinh sạch chất trải qua nhiều bước, sử dụng nhiều hệ dung môi khác nhau, nên các tín hiệu nhiễu trong phổ đồ có thể được giải thích là do các dung môi chưa được loại bỏ hoàn toàn khỏi chất tinh sạch.
Kết hợp các dữ liệu thu được bao gồm: giá trị Rf tương đồng với quercetin chuẩn, giá trị phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 1H tương đồng với chất quercetin. Chúng tôi dự kiến chất C2 là quercetin với công thức cấu tạo như sau:
Quercetin là một flavonoids phổ biến trong tự nhiên, thuộc nhóm polyphenols, có nhiều trong các loại rau, củ, quả. Đã có nhiều nghiên cứu về cấu trúc, đặc tính, công dụng và chức năng của quercetin. Thêm vào đó, Dasha cùng cộng sự đã xác định quercetin là một thành phần được tìm thấy trong cây Sophora japonica, đồng thời các nghiên cứu khác cũng chỉ ra sự xuất hiện của quercetin trong các họ thực vật khác nhau [15, 26]. Điều này củng cố thêm rằng chất C2 là quercetin và kết quả chúng tôi thu được là tương đồng với những nghiên cứu trước đây.