4. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài
3.2.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả
nhân chồi Thổ nhân sâm
Cytokinin kích thích sự phân chia tế bào, phân hóa chồi bất định. Do cytokinincó khả năng tổng hợp axit nucleic và protein. BAP là một loại cytokinin thường được sử dụng để nhân nhanh chồi trong nuôi cấy in vitro.
Chúng tôi tiến hành thí nghiệm thăm dò nồng độ BAP lần lượt là: 0,0mg/l; 0,5mg/l; 1,0 mg/l; 1,5 mg/l; 2,0 mg/l, sử dụng đoạn thân mang chồi nách khoảng 1cm làm vật liệu cấy trên môi trường nhân nhanh. Theo dõi kết quả trong 4 tuần và 8 tuần nuôi cấy. Kết quả nuôi cấy được trình bày trong bảng 3.3 và hình 3.2.
Kết quả bảng 3.3 cho thấy các công thức có bổ sung BAP cho hệ số nhân chồi cao hơn so với công thức đối chứng (công thức 1) không bổ sung BAP. Kết quả sau 8 tuần nuôi cấy cho thấy: Công thức 1 cho số chồi/mẫu đạt 1,46 chồi. Các công thức thí nghiệm còn lại cho số chồi/mẫu đạt từ 1,82 chồi đến 2,60 chồi. Trong đó công thức 4 với nồng độ BAP bổ sung là 1,5 mg/l cho số chồi/mẫu cao nhất là 2,60 chồi. Các công thức thí nghiệm 2, 3, 5, 6 cho số chồi/mẫu lần lượt là 1,82 chồi; 1,94 chồi; 1,98 chồi và 1,51 chồi. Khi nồng độ BAP qua ngưỡng tối thích ở công thức 4 thì số chồi/mẫu có xu hướng giảm dần ở công thức 5 và 6.
Bảng 3.3. Ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả năng nhân chồi Thổ nhân sâm Công thức Nồng độ BAP (mg/l) Tổng số mấu/CT (mẫu) Số chồi/mẫu (chồi) Chiều cao chồi (cm) Chất lượng chồi Sau 4 tuần 1 (ĐC) 0 50 1,1 ± 0,17 1,88 ± 0,06 ++ CT 2 0,5 50 1,6 ± 0,07 1,54 ± 0,08 ++ CT 3 1,0 50 1,72 ± 0,07 1,44 ± 0,07 +++ CT 4 1,5 50 2,24 ± 0,19 1,32 ± 0,05 +++ CT 5 2,0 50 1,66 ± 0,10 1,24 ± 0,03 ++ CT 6 2,5 50 1,37 ± 0,09 1,11 ± 0,03 + Sau 8 tuần 1 (ĐC) 0 50 1,46 ± 0,29 2,47 ± 0,13 ++ CT 2 0,5 50 1,82 ± 0,18 2,21 ± 0,31 ++ CT 3 1,0 50 1,94 ± 0,17 1,98 ± 0,02 +++ CT 4 1,5 50 2,60± 0,22 1,86 ± 0,09 +++ CT 5 2,0 50 1,98 ± 0,19 1,63 ± 0,14 ++ CT 6 2,5 50 1,51 ± 0,15 1,49 ± 0,12 +
(Ghi chú: chồi tốt: + + +, Chồi trung bình: + +, Chồi kém: +)
Kết quả bảng 3.3 còn cho thấy, khi bổ sung BAP thì chiều cao chồi giảm dần so với công thức đối chứng (không bổ sung BAP). Chiều cao chồi giảm từ 2,21 cm ở công thức 2 đến 1,49 cm ở công thức 6, trong khi công thức đối chứng chồi đạt chiều cao là 2,47 cm. So sánh hai mẫu độc lập theo tiêu chuẩn phi tham số của Kruskal và Wallis (công thức đối chứng và công thức 2). Kết quả phân tích cho thấy sự sai khác về chiều cao chồi là không có ý nghĩa, độ tin cậy 95%. Do đó, lựa chọn công thức đối chứng hoặc công thức 2 đều cho sự sinh trưởng của chồi tốt.
Chất lượng chồi ở thí nghiệm được đánh giá từ mức kém đến mức tốt. Trong đó, công thức 2, công thức 5 (nồng độ BAP là 0,5 mg/l, 2,0 mg/l) có chất lượng chồi không khác biệt so với công thức 1 (công thức đối chứng - không bổ sung BAP); công thức 3, 4 cho chồi chất lượng cao hơn đối chứng và được đánh giá ở mức tốt; công thức 6 khi nồng độ BAP ở mức cao là 2,5 mg/l cho chất lượng chồi kém (chồi gầy, lá vàng nhạt, xoăn).
Phân tích phương sai một nhân tố kết quả cho thấy F > F crit. Vì vậy, số chồi/mẫu ở các công thức khác nhau là do khác nhau về hàm lượng BAP bổ sung vào môi trường. Nếu xét đồng thời các chỉ tiêu (số chồi/mẫu, chiều cao chồi và chất lượng chồi) thì chỉ tiêu số chồi/mẫu được coi là ưu tiên trong giai đoạn nhân nhanh. Do đó có thể kết luận: công thức 4 (bổ sung BAP 1,5 mg/l vào môi trường nền MS + đường sucrose 30 g/l + agar 6,0 g/l) là thích hợp nhất trong thí nghiệm, cho số chồi/mẫu đạt 2,60 chồi, sự sinh trưởng của chồi đảm bảo, chất lượng chồi tốt.
Công thức bổ sung BAP nồng độ 1,5 mg/l vào môi trường nền được chọn để sử dụng trong nghiên cứu các thí nghiệm nhân nhanh tiếp theo (BAP kết hợp với kinetin; BAP kết hợp với IBA).
Đối chứng BAP 1,5mg/l
Hình 3.2: Ảnh hưởng của hàm lượng BAP đến khả năngnhân nhanh chồi Thổ nhân sâm (sau 8 tuần nuôi cấy)