Chương 1 Tổng quan tài liệu
1.3. Chuyển gen ở đậu tương nhờ Agrobacterium
1.3.2. Nghiên cứu biểu hiện gen CHI
Có nhiều công trình khoa học nghiên cứu về gen CHI trên các đối tượng khác nhau thu được nhiều thành công. Năm 2012 Yue Zhang và cs đã nhân dòng và biểu hiện gen CHI ở lạc thành công, kết quả chỉ ra rằng đó là gen CHI loại I mã hóa 1 peptide cho 255 amino acid [43]. Năm 2005 Lyle Ralston và cs tái lập một phần của flavonoid và isoflavonoid sinh tổng hợp trong nấm men sử dụng CHI I và CHI II ở đậu tương [25]. Cheng và cs (2011) đã phân lập được trình tự gen mã hóa enzyme chalcone isomerase từ lá của cây bạch thảo (Ginkgo biloba L.) được gọi là GbCHI. Gen GbCHI
chứa hai intron và ba exon, mã hóa một peptide gồm 244 amino acid. RQPCR cho thấy GbCHI đã được biểu hiện theo mô cụ thể trong G. biloba. Protein tái tổ hợp được biểu hiện thành công trong một dòng E.coli
với vector pET-28a. Hoạt tính enzyme in vitro, được khảo sát bởi phân tích HPLC, chỉ ra rằng protein GbCHI tái tổ hợp có thể xúc tác sự hình thành của
naringenin từ 6'-hydroxychalcone. Phân tích RQPCR cho thấy hoạt động CHI
tương quan với sự thay đổi mức độ sao chép của gen CHI, hoạt động của
GbCHI cũng tương quan dương với nồng độ flavonoid trong lá cây bạch thảo, cho thấy CHI là một gen chính điều chỉnh sự tích tụ flavonoid trong lá cây bạch thảo [12].
Wang và cs (2012) đã tiến hành phân lập cDNA CHI từ cây nho (Vitis
vinifera L.), tạo protein tái tổ hợp được tinh chế và đã được tạo ra kháng thể
polyclonal. Sử dụng các công cụ, biểu hiện và mô địa hoá của CHI trong việc
phát triển quả nho đã được phân tích bằng kỹ thuật RT-PCR, gel blot và kỹ
thuật miễn dịch hóa học. Nghiên cứu cho thấy rằng sự biểu hiện của CHI phụ
thuộc vào giai đoạn phát triển, và protein CHI phân bố chủ yếu trong các bó
mạch trên tất cả các giai đoạn phát triển của quả nho [39].
Wang và cs (2018) đã tiến hành phân tích trình tự và kết quả liên kết
đồng đẳng cho thấy chuỗi protein CnCHI có độ tương đồng cao với các chuỗi
protein khác của CHI. Protein CnCHI có một miền bảo thủ Chalcone 3, được
bảo tồn trong quá trình tiến hóa, cho thấy rằng CnCHI là một thành viên của
họ gen CHI. Kết quả phân tích cho thấy biểu hiện CnCHI trong hoa cao hơn
nhiều so với rễ, thân, lá của Chamaemelum nobile, cho thấy gen CnCHI là
một gen biểu hiện khác biệt, là một loại enzyme chủ chốt trong con đường