3. Nội dung nghiên cứu
3.2.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số
DNA tổng số được tách từ lá non của các cây đậu tương chuyển gen và cây đối chứng không chuyển gen. Dung dịch chứa DNA tổng số được kiểm tra bằng kỹ thuật điện di trên gel agarose 0,8% (Hình 3.6). Hình ảnh điện di DNA tổng số ở hình 3.6 cho thấy ở tất cả các làn chạy điện di đều cho băng DNA sắc nét, rõ ràng và ít bị đứt gãy.
Đồng thời với việc chạy điện di, DNA tổng số còn được kiểm tra bằng quang phổ hấp thụ ở bước sóng 260nm. Kết quả đo quang phổ hấp thụ ở bước sóng 260 nm và 280 nm, tính tỷ lệ OD260/OD280 thu được kết quả là 1,8 – 2,0.
Kết quả kiểm tra DNA tổng số bằng phương pháp điện di và quang phổ hấp thụ đã chứng tỏ các mẫu DNA tổng số tách từ lá non các cây đậu tương chuyển gen và cây đối chứng không chuyển gen đảm bảo hàm lượng và độ tinh sạch và có thể sử dụng cho các phản ứng sinh học phân tử tiếp theo.
◄
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Hình 3.6. Hình ảnh điện di kiểm tra sản phẩm DNA tổng số tách từ lá các cây
đậu tương chuyển gen và cây không chuyển gen. 1-9: DNA tổng số tách từ các mẫu lá của các cây đậu tương chuyển gen; 10: DNA tổng số tách từ các
mẫu lá của các cây đậu tương không chuyển gen
3.2.2. Kết quả phân tích PCR khuếch đại gen chuyển GmCHI
DNA tổng số của 9 cây đậu tương chuyển gen ở thế hệ T0 và cây đối chứng không chuyển gen được sử dụng cho PCR để khuếch đại cấu trúc
GmCHI-cmyc-KDEL. Kết quả PCR với với cặp mồi GmCHI-NcoI-F/GmCHI- cmyc-SacI-R khuếch đại đoạn GmCHI-cmyc-KDEL được thể hiện ở hình 3.8.
Hình 3.7. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm PCR khuếch đại đoạn gen
GmCHI-cmyc-KDEL từ các cây đậu tương chuyển gen và cây không chuyển gen với cặp mồi GmCHI-NcoI-F/GmCHI-cmyc- SacI-R. (+): Sản phẩm PCR từ vector pCB301- GmCHI; (-): Kết quả PCR từ cây không chuyển gen; 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9: Kết quả PCR từ các cây đậu tương chuyển gen T0; M; thang
DNA 1 kb.
Sản phẩm điện di ở hình 3.7 cho thấy, trong 9 cây đậu tương chuyển gen T0 được phân tích đã thu được 8 cây cho kết quả PCR nhân đoạn
GmCHI-cmyc-KDEL từ hệ gen có kích thước khoảng 0,7kb. Hiệu quả chuyển gen ở giai đoạn T0 đạt 3,56% (8/225). Như vậy, ở thế hệ T0 đã tạo được 8 cây đậu tương chuyển gen GmCHI.
Gen GmCHI nội tại có kích thước 657 bp [2], [24], cấu trúc GmCHI- cmyc-KDEL có kích thước 702 bp và khi khuếch đại bằng PCR với cặp mồi
GmCHI-NcoI-F/GmCHI-cmyc-SacI-R thu được đoạn DNA có kích thước khoảng 700 bp (Hình 3.8). Như vậy bước đầu có thể nhận xét rằng gen chuyển GmCHI đã xâm nhập vào hệ gen cây đậu tương được chuyển gen. Tuy nhiên, gen chuyển GmCHI có hợp nhất vào hệ gen và có biểu hiện thành
protein tái tổ hợp ở cây đậu tương chuyển gen hay không cần phải tiếp tục phân tích bằng Southern blot và Western blot.