1. Môi trường nuôi cấy
4.4. Tính ổn định của ngân hàng tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-
NICVB-WCB01-18B khi bảo quản theo thời gian tại nhiệt độ tối ƣu -700C
Tính ổn định của ngân hàng mẫu chuẩn tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01-18B được xác định bằng cách kiểm tra độ sống các ống tế bào sau khi sản xuất ở điều kiện bảo quản -700 trong môi trường ni tơ lỏng. Chất lượng
của ngân hàng mẫu chuẩn được thể hiện qua đồ thị xu hướng kết quả độ sống tế bào. Khi phân t ch xu hướng các chỉ số định lượng, theo qui định của WHO TRS No, 978 và nhiều nhà sản xuất cũng như cơ quan kiểm định quốc gia trên thế giới tính ổn định (hạn dùng) của ngân hàng mẫu chuẩn phải đạt thời gian 10- năm.
Vùng ngoài khoảng (GM ± 2SD) là vùng cảnh báo. Nếu có điểm rơi vào vùng này cũng phải tìm nguyên nhân để khắc phục phòng ngừa.
Các số liệu được kết quả đánh giá t nh ổn định ngân hàng tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01-18B tại (bảng 3.7 và 3.8 và (hình 3.5 và 3.6) thể hiện được rõ sự ổn định khi bảo quản ở điều kiện tối ưu theo thời gian sau sản xuất 3; 6; 12 tháng là (NICVB-MCB01-18A: 2,05; 2,15; 2,09 và NICVB- WCB01-18B: 2,11; 2,06; 1,98) các kết quả đều nằm trong khoảng giới hạn (GM ± 2 SD) và đạt yêu cầu ≥ 9 % so với độ sống sau khi sản xuất là 2 x 106 tế bào/ống/ml tương đương ≥ 1,8 x1 6 tế bào/ống/ml). Không có điểm nào rơi vào giới hạn cảnh báo và giới hạn hành động và không có sự khác biệt có nghĩa thống kê về giá trị độ sống tế bào vero tại các thời điểm đánh giá theo thời gian [6;10;14; 16;18;20;37]. Như vậy ngân hàng tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01-18B đạt yêu cầu về tính ổn định khi bảo quản ở điều kiện tối ưu nhiệt độ -700C trong ni tơ lỏng theo thời gian.
KẾT LUẬN
Qua kết quả nghiên cứu về đánh giá chúng tôi có các kết luận như sau:
1. Ngân hàng mẫu chuẩn tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB- WCB01-18B được sản xuất đạt tiêu chuẩn theo quy định WHO TRS No.932, phần 3, 2006 cho một sản phẩm mẫu chuẩn.
. Quy trình chuẩn SOP đánh giá chất lượng tế bào vero dùng cho kiểm định vắc xin và sinh phẩm y tế đạt các chỉ tiêu về tiêu chuẩn chất lượng theo khuyến cáo của WHO TRS No. 978, phần 3, 13 và được phê chuẩn là tài liệu thực hành và áp dụng tại NICVB và các phòng thí nghiệm kiểm định trên cả nước.
3. Ngân hàng mẫu chuẩn vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01- 18 đạt yêu cầu về đánh giá chất lượng (Nhận dạng, vô trùng, độ sống, t nh đồng nhất độ sống giữa các ống tế bào, không nhiễm mycoplasma, Không nhiễm tác nhân ngoại lai, không nhiễm vi khuẩn lao và tính ổn định của tế bào bảo quản ở -70oC trong môi trương ni tơ lỏng).
4. Ngân hàng mẫu chuẩn vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01- 18 đạt yêu cầu về tính ổn định độ sống các ống tế bào khi bảo quản ở nhiệt độ - 700C trong môi trường ni tơ lỏng theo thời gian.
KIẾN NGHỊ
1. Nghiên cứu tiếp tính ổn định độ sống ngân hàng tế bào vero 76 NICVB- MCB01-18A và NICVB-WCB01-18B tại các mốc thời gian tiếp theo hàng năm để bổ sung thêm số liệu phân tích hoàn chỉnh tính ổn định khi bảo quản theo thời gian.
2. Qua kết quả nghiên cứu số liệu cho thấy quy trình chuẩn (SOP) uy trình
chuẩn đánh giá chất lượng tế bào vero dùng cho kiểm định vắc xin và sinh phẩm y tế’’ đáp ứng các tiêu chuẩn chất lượng theo yêu cầu của WHO.
3. Chất lượng của Ngân hàng tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB- WCB01-18B đạt yêu cầu chất lượng theo tiêu chuẩn của WHO. Đề nghị Ban lãnh đạo NICV căn cứ hồ sơ chất lượng ra quyết định công nhận ngân hàng tế bào vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01-18B chuẩn quốc gia Việt Nam dùng cho kiểm định chất lượng vắc xin, sinh phẩm y tế.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu tiếng Việt
1. Bộ môn Vi sinh y học, trường Đại học Y Hà Nội 7 , Vi sinh y học”, nhà xuất bản Y học, Hà nội, tr. 160-163.
2. Bộ Y tế (2018), "Dược điển Việt Nam V", nhà xuất bản Y học, Hà Nội, mục 15.11. Phụ lục 323.
3. Qui trình chuẩn (SOP-KĐQG MT-06-14 hướng qui trình nuôi cấy và gặt tế bào.
4. Qui trình chuẩn (SOP-KĐQG số 31 hướng dẫn quản lý, bảo quản và phân phối mẫu chuẩn dùng trong kiểm định chất lượng vắc xin và sinh phẩm.
5. Viện Kiểm định quốc gia vắc xin và sinh phẩm y tế (2014), Bộ tiêu chuẩn xuất
xưởng vắc xin- sinh phẩm”,tài liệu lưu hành nội bộ, tr.150 – 155.
6. Nguyễn Đình ảng và cs (2004). Nghiên cứu sản xuất một số mẫu chuẩn quốc
gia vắc xin và sinh phẩm để tiêu chuẩn hóa sản phẩm vắc xin và sinh phẩm Việt Nam. Đề tài cấp nhà nước KC-10-01, nghiệm thu 12/2004.
7. Ngô Đắc Chứng 7 , Sinh sản và phát triển cá thể động vật, NX ĐH Huế. 8. Hoàng Minh Hiền (2001). Nghiên cứu văcxin mẫu chuẩn quốc gia phòng bệnh
dại. Luận án Tiến sỹ Y học.
9. Hoàng Quang Huy (2003). Đánh giá chất lượng kháng độc tố uôn ván dự tuyển
mẫu chuẩn quốc gia. Luận văn thạc sỹ y học.
10. Nguyễn Mai Hương 18 . Nghiên cứu tính ổn định công hiệu và xác định mối
tương quan giữa hai phương pháp tạo đám hoại tử (PFU) và liều gây nhiễm 50% nuôi cấy tế bào (CCID50) của vắc xin sởi dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia Việt Nam. Luận văn thạc sỹ y học.
11. Nguyễn Như Hiền, Công nghệ sinh học 7 , tập 1: Sinh học phân tử và tế bào, Cơ sở khoa học của công nghệ sinh học, NX Giáo dục.
12. Nguyễn Như Hiền, Trịnh Xuân Hậu (2000), Tế bào học, NX Đại học quốc gia Hà Nội.
13. Phạm Thành Hổ (1995), Sinh học đại cương, Tế bào học, Di truyền học, Học thuyết tiến hoá, Tủ sách Đại học tổng hợp Tp. Hồ Chí Minh.
14. Phạm Văn Hùng 5 . Nghiên cứu tính ổn định của vắc xin BCG mẫu chuẩn quốc gia Việt Nam lần thứ nhất. Luận văn thạc sỹ y học.
15. ISO IEC 17 5: 4. .1 qui định sử dụng mẫu chuẩn trong kiểm định chất lượng sản phẩm thuốc và sinh phẩm y tế.
16. Nguyễn Thị Kiều 15 . Đánh giá t nh ổn định của vắc xin sởi sản xuất tại Việt Nam từ năm 9 đến năm 13. Luận án Tiến sỹ y học.
17. Hoàng Thị Liên (2000). Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn hiệu lực cho mẫu chuẩn quốc gia vắc xin uống phòng bại liệt. Luận án Tiến sỹ y học.
18. Huỳnh Phương Liên, Nguyễn Anh Tuấn và cs (2005). Nghiên cứu sản xuất vắc
xin mẫu chuẩn viêm não Nhật Bản VNR203 dùng trong kiểm định chất lượng vắc xin VNNB. Đề tài nhánh cấp nhà nước KC10-10, nghiệm thu 1/2005.
19. Nguyễn Hoàng Lộc (2006), Công nghệ tế bào, NX ĐH Huế.
20. Đỗ Thủy Ngân (2000). Nghiên cứu sản xuất vắc xin mẫu chuẩn quốc gia viêm gan B từ huyết tương người dung để kiểm định vắc xin viêm gan B sản xuất tại Việt Nam. Luận án Tiến sỹ sinh học.
21. Phan Kim Ngọc, Phạm Văn Phúc 7 , Công nghệ sinh học trên người và động vật, NX Giáo dục.
22. Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng 6 , Công nghệ sinh học, tập : CNSH tế bào, NX Giáo dục.
Tài liệu tiếng Anh
23. Campbell, Neil A.; Brad Williamson; Robin J. Heyden (2006). Biology:
Exploring Life. Boston, Massachusetts: Pearson Prentice Hall. ISBN 0-13-
250882-6.
24. Cell Movements and the Shaping of the Vertebrate Body in Chapter 21
of Molecular Biology of the Cell fourth edition, edited by Bruce Alberts (2002) published by Garland Science.
developing embryos. It is also common to describe small molecules such as amino acids as "molecular building blocks".
25. Chung Keel Lee 11 , Validation system and inspection”, WHO global Learning Opptunities for vaccine quanlity, KFDA.
26. Development and Characterization of a Stable Vero Cell Line Constitutively Expressing Peste des Petits Ruminants Virus (PPRV) Hemagglutinin Protein and Its Potential Use as Antigen
27. Frydenberg, J., and C. Christiansen. 1985. The sequence of 16S rRNA from mycoplasma strain PG50. DNA 4: 127-137.
28. Guidelines for Independent Lot Release of Vaccines by Regulatory Authorities, World Health Organization, 2010.
29. Jamie L Almeida1*, Carolyn R Hill2 and Kenneth D Cole (2011), Authentication of African green monkey cell lines using human short tandem repeat markers. BMC Biotechnology 2011, 11:102
30.Lodish H, Berk A, Matsudaira P, Kaiser CA, Krieger M, Scott MP, Zipurksy SL, Darnell J (2004). Molecular Cell Biology. WH Freeman: New York, NY. ISBN 978-0716743668.
31. Nicole C. Ammerman (2009), Growth and Maintenance of Vero Cell Lines, , NIH, Curr ProtocMicrobiol. Author manuscript Council of Europe European, European Direction for the quality of medicine (COE-EDQM) (2010), 5.2.3. Cell substrates for the production of vaccines for human use, European
pharmacopoeia 7.0, pp. 530-533.
32. Osada N., Kohara A., Yamaji T., Hirayama N., Kasai F., Sekizuka T., Kuroda M., Hanada K. (2014); The genome landscape of the African green monkey kidney-derived Vero cell line; DNA Res. 21: 673-683.
33. P Noel Barrett, Wolfgang Mundt, Otfried Kistner, M Keith Howard (2009) Vero cell platform in vaccine production: Moving towards cell culture-based viral vaccines, Expert Rev. Vaccines 8(5), 607–618.
34. Rebecca Sheets (2000); History and Characterization of the Vero Cell Line--A Report prepared by CDR USPHS CBER/OVRR/DVRPA/VVB for the
Vaccines and Related Biological Products Advisory Committee Meeting to be held on May 12, 2000.
35. Supaporn Phumiamorn (2010). Reviewing preparation and collaborative study of regional working reference preparation of Japanese encephalitis vaccines,
Institute of biological Products, Thai Lan.
36. V. Balamurugan (2006), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Serosurveillance of PPRV, Clinical and vaccine immunology, p. 1367–1372.
37.Vincent-Falquet J, Peyron L, Souvras M, Moulin J, Tektoff J, Patet J:
Qualification of working cell banks for the vero cell line to produce licensed human vaccines. Developments in Biological Standardization 1989, 70(1):53- 56.
38. WHO (1998), Requirements for the use of animal cells as in vitro substrates for the production of biologicals, WHO Expert Committee on Biological Standardization. Forty-seventh report. Geneva, World Health Organization, WHO Technical Report Series, No. 878, Annex 1.
39. WHO 4 , Part 2: Validation”, A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements, pp.63 - 87.
40. WHO (2006), Recommendations for the preparation, characterization and establishment of international and other biological reference standards. WHO Technical Report Series, No. 932.
41. WHO (2011), Manual for the establishment of National and other secondary stabdards for vaccines.
42. WHO (2013), Recommendations for the evaluation of animal cell cultures as substrates for the manufacture of biological medicinal products and for the characterization of cell banks, WHO Expert Committee on Biological Standardization, Sixty-first report. Geneva, World Health Organization, WHO Technical Report Series, No. 978, Annex 3.
43. WHO (2013). Guidelines for preparation, characterization and establishment of International and other standard and refneuce for biological substances. N. 800, Annex 4.
44. WHO Expert committee on Biological Stadardization (2015). WHO technical Report Series No. 993.
45. Yasumura Y., Kawakita Y (1963), A line of cells derived from African green monkey kidney. Nippon Rinsho 21:1209-1210.
46. Yeowon Sohn 11 , Analytical method validation of bioassay”. Training course on quanlity control of vaccines used in EPI, Ha Noi.
47. Audrey Jean, Florence Tardy, Omran Allatif, Isabelle Grosjean, Bariza Blanquier, Denis Gerlier (2017), Assessing mycoplasma contamination of cell cultures by qPCR using a set of universal primer pairs targeting a 1.5 kb fragment of 16S rRNA genes. journal.pone.0172358.
48. Jamie L Almeida1, Carolyn R Hill and Kenneth D Cole (2011), Authentication of African green monkey cell lines using human short tandem repeat markers.
BMC Biotechnology 2011, 11:102
Các trang Wesite
49. http://www.biomedcentral.com/1472-6750/11/102 50. http://www.biomedcentral.com/1472-6750/11/102
VIỆN KIỂM ĐỊNH QUỐC GIA VẮC XIN VÀ SINH PHẨM Y TẾ
Quy tr h chu
ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG TẾ BÀO VERO DÙNG CHO KIỂM ĐỊNH VẮC XIN VÀ SINH PHẨM Y TẾ
Số: MT06-16
Người soạn thảo Người kiểm tra Người phê duyệt
Họ và tê Nguyễ Thị Mai Hươ g Nguyễ Thị Vâ Quỳ h Phạm Vă Hù g Chữ ký
Ngày
Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm Y tế (NICVB)
SOP: Đánh giá chất lượng tế bào vero MT06-16
1. MỤC ĐÍCH
- SOP ày mô tả quy trình đá h giá chất ượ g tế bào vero dùng cho kiểm đị h chất ượ g vắc xi và si h ph m y tế.
2. PHẠM VI ÁP DỤNG
- Khoa Môi trườ g th c ghi m-Vi Kiểm đị h Quốc gia Vắc xi và Si h ph m y tế (NICVB).
- Các dò g tế bào uôi cấy: Vero 76 ATCC CRL1587, Vero 76 NICVB-MCB01-18A và NICVB-WCB01-18B
3. TRÁCH NHIỆM
- Các cá bộ thuộc Khoa Môi trườ g Th c ghi m được phâ cô g th c hi thử ghi m c trách hi m tuâ thủ theo SOP ày.
- Trưở g khoa c trách hi m giám sát và đảm bảo SOP ày được tuâ thủ.
4. THUẬT NGỮ VÀ ĐỊNH NGHĨA
- SOP (Standard Operating Procedure): Quy tr h th c hà h chu . - FBS: Huyết tha h bào thai bê
- PCR: Phả ứ g khuyếch đại DNA/RNA
- ATCC (American Type Culture Co ectio ): Chủ g chu quốc tế - MCB (Master Ce Ba k): Ngâ hà g tế bào gốc giố g
- WCB (Worki g Ce Ba k): Ngâ hà g tế bào àm vi c
- WHO TRS (World Health Organization Tech ica Report Series) Báo cáo kỹ thuật của tổ chức y tế thế giới
- DNA (Acide Deoxyribo uc eic): Vật i u di truyề DNA - RNA (Acide Ribo uc eic): Vật i u di truyề RNA
5. N I DUNG
5.1. Thiết bị và nguyên vật liệu
- Máy PCR (Applied Biosystem, Mỹ mã PC 04 VR)
- Máy PCR real-time 7500 FAST (Applied Biosystem, Mỹ) - Máy đo ồ g độ DNA (Nanodrop- Thermo, Mỹ)
Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm Y tế (NICVB)
SOP: Đánh giá chất lượng tế bào vero MT06-16
- Máy tách chiết DNA – RNA t động SaMag 12-Sacase Biotechnology - Giá từ (Thermo, Mỹ)
- Pipetma đơ các oại 50 µ , 100-200µl, 1000 µl, 5000 µl (Gilson): mã GG29329, EJ87599, EG53274, 467106
- Máy ắc JK Mã : VT 03 VR/ Thermo VT 04 VR. - Pipet aid Model 4-000-220, USA
- Bơm châ khô g (Ga ekamp) mã VP 01 VR - Bể ổ hi t (She - Lab) mã WB 03 VR - Máy đo pH (Themor) mã pH-14 VR - Tủ cấy vô trùng (Nuaire) mã LH 06 VR
- Câ phâ tích độ nhạy 0.0001g (Sartorius, Đức) - Kính hiển vi quang học (Olympus SZ61, Nhật Bản) - Bộ ọc 1 c đườ g kí h mà g ọc 0,22μm o - Tủ ấm CO2 Astec SCA-165DS
- Miseq Reagent Kit (MS-102-2002)
- Library Quantification Kit – Illumina (KK4824) - Các viên bi từ tính (Ampure Bead)
- Kit real-time RT-PCR Invitrogen
- Kit tách chiết DNA và ARN (Qiage , Đức) - Bộ sinh ph m PCR (Qiage , Đức)
- Dung dịch AMPure XP bead ở 2-80C - Hóa chất đi n di DNA
- Bộ thuốc nhuộm Zeihl Neelsen (Nam Khoa) - Tế bào Vero (ATCC, CRL-1587)
- L- Glutamin 200 mM (Sigma, M3641) - FBS (Sigma, F2442): 100 ml
- Kháng sinh: Peniciline và Streptomycine 10mg/ml (Gibco, 14200-075) - NaHCO37,5% (Gibco, 25080-094)
Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin và Sinh phẩm Y tế (NICVB)
SOP: Đánh giá chất lượng tế bào vero MT06-16
- Môi trườ g tă g si h Thioglycolate/30-35oC và Soybean/20-25oC mỗi loại 10 ống cho 1 thử nghi m.
- Neutral Red (mp- bio, 1023438) - Du g dịch phủ thạch MEM 2X - Agarose ME (Nisui-Nhật bả ) - Eagle MEM (Wako –Nhật bả ) - Tuýp tế bào: 01 tuýp
- Môi trườ g MEM 10%FBS hoặc D-MEM 5%FBS - Trypsin EDTA 0,25%: 100ml
- Chai uôi tế bào oại 25cm2, 75 cm2, 125 cm2 - Bộ ọc 1l c đườ g kí h mà g ọc 0,22μm lo - Qu áo, kh u tra g, gă g tay vô trù g
- Khă khô g si h bụi
- Pipét h a vô trù g 2m , 5m , 10m , 25m - Pipét aid
- Bơm kim tiêm vô trù g (1m , 5m , 10m ) - Typ h a vô trù g: 5m , 15m , 25m - Cốc thủy ti h c mỏ 1 ít
- PBS (-) 1X: 500 ml
- Độ g vật thí ghi m: Chuột hắt trằ g trưở g thà h trọ g ượ g 15-20g/chuột số ượ g 20 co cho 1 thử ghi m. Chuột a g trọ g ượ g 350-450g/chuột số ượ g 5