Phần 4 Kết quả nghiên cứu
4.2. Xác định nguyên nhân gây bệnh chảy gôm trên cây có múi tại huyện
4.2.2. Phân lập Phytophthora từ đất và cây cam bị bệnh chảy gôm
Nấm Phytophthora có khả năng tồn tại trong đất, rễ, gốc và trong mô thân
cây bị bệnh, trên môi trường nhân tạo chúng thường mọc chậm, do vậy dễ bị cạnh tranh bởi các loài nấm khác. Khả năng phân lập trực tiếp từ mô bệnh rất khó thành công đặc biệt mô lấy từ vùng rễ và đất. Sử dụng mồi bẫy để xác định sự xuất hiện nấm Phytophthora sp. trong mẫu bệnh và từ mồi bẫy sẽ sử dụng làm nguyên liệu để phân lập. Nấm Phytophthora gây hại trên cả thân, quả, rễ nhưng nấm gây hại nặng trên thân, rễ làm cây bị chết.
Các mẫu bệnh (đất, thân) đã được thu thập lần tại các vườn trồng cam quýt huyện Bạch Thông, tỉnh Bắc Kạn.
Trong thí nghiệm phân lập nấm từ đất, chúng tôi tiến hành bẫy cánh hoa hồng từ dịch đất thu thập tại vùng gốc cây bị bệnh chảy gôm và sau đó cấy cánh hoa hồng nhiễm bệnh trên môi trường chọn lọc. Kết quả bẫy cho thấy tất cả các cánh hoa hồn bẫy đều nhiễm bệnh (Bảng 4.5, Hình 4.3). Quan sát các hoa nhiễm bệnh thấy có hình thành bọc bào tử (sporangia) điển hình
của Phytophthora. Tuy nhiên, khi cấy các mảnh hoa trên môi trường chọn lọc,
chúng tôi không thu được Phytophthora mà chỉ thu được Pythium. Có lẽ
Pythium trong đất cũng nhiễm trên cánh hoa và sinh trưởng mạnh hơn
Phytophthora trên môi trường chọn lọc dẫn tới khó hoặc không thể phân lập
thuần được Phytophthora. Một mẫu nấm Pythium ký hiệu là P1 đã được sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.
Bảng 4.5. Kết quả phân lập Phytophthora từ đất vùng gốc cây bị bệnh chảy gôm bằng bẫy cánh hoa hồng
Mẫu Nguồn Số cánh hoa hồng Số cánh hoa hồng bị nhiễm bệnh Lần 1 Lần 2 Lần 3 1 Quang Thuận 2 2 2 2 2 Quang Thuận 2 2 2 2 3 Dương Phong 2 2 2 2 4 Dương Phong 2 2 2 2 5 Đôn Phong 2 2 2 2
Hình 4.3. Bẫy Phytophthora từ đất vùng gốc cây bị bệnh chảy gôm tại huyện Bạch Thông (Lần 1)
Trong thí nghiệm phân lập Phtophthora từ cây, các mảnh mô từ cây bị bệnh chảy gôm đã được đặt trực tiếp trên môi trường chọn lọc PSM. Kết quả cho thấy phân lập trực tiếp Phytophthora từ mô bệnh khó hơn nhiều; chỉ 2/3 lần thí nghiệm có thể bẫy được Phytophthora từ mô. Ngoài ra, số mô hình thành Phtophthora / số mô đặt vào đĩa môi trường chọn lọc cũng thấp hơn (Bảng 4.6, Hình 4.4). Phân lập trực tiếp Phytophthora mặc dù hiệu quả kém nhưng có một ưu điểm quan trọng là loại bỏ được các loài Pythium hoại sinh vốn nhiều trong đất.
Tổng số 9 mẫu Phytophthora phân lập từ mảnh mô đã được cấy thuần trên môi trường PSM. Quan sát đặc điểm tản nấm cũng như bọc bào tử hình thành, chúng tôi nhận thấy chúng đều có đặc điểm hình thái giống nhau (về tản nấm, hình thái bọc bào tử và cách hình thành bọc bào tử). Hai mẫu nấm Phytophthora
ký hiệu là P2 và P3 đã được sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.
Bảng 4.6. Kết quả phân lập trực tiếp nấm Phytophthora từ mô cây ở cây có múi trên môi trƣờng PSM
Mẫu Nguồn Số mô/lần Số mẫu mô hình thành Phytophthora Lần 1 Lần 2 Lần 3 1 Quang Thuận 3 0 3 0 2 Quang Thuận 3 0 2 1 3 Dương Phong 3 0 0 2 4 Dương Phong 3 0 1 0 5 Đôn Phong 3 0 0 0
Hình 4.4. Phân lập trực tiếp nấm Phytophthora từ mô cây ở cây có múi trên môi trƣờng PSM