Phân lập nấm hại cây ngô dựa theo Cẩm nang chẩn đoán bệnh cây ở Việt Nam năm 2009 (Lester W.Burgess et al., 2009).
Lau sạch bàn làm việc bằng cồn 70%. Khử trùng dụng cụ bằng cồn 70%. Rửa mẫu lá trong nƣớc để loại bỏ đất bụi và tạp chất. Khử trùng mẫu bằng cồn 70%. Cắt những miếng cấy nhỏ (khoảng 2 x 2 mm) từ phần ranh giới giữa mô khỏe và mô bệnh, cấy lên đĩa môi trƣờng. Mỗi đĩa petri đặt 7 - 9 vết mô bệnh. Đặt đĩa cấy ở nhiệt độ khoảng 28oC. Kiểm tra đĩa cấy hàng ngày, khi các tản nấm đã phát triển thì tiến hành cấy truyền chúng để nhận đƣợc nguồn nấm thuần.
3.6.4. Nghiên cứu ảnh hƣởng củ môi trƣờng đến sự phát triển củ nấm
B. maydis
* Thí nghiệm đƣợc tiến hành theo 3 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần nhắc lại 1 đĩa petri:
+ Công thức 1: Nuôi cấy nấm B. maydis trên môi trƣờng PGA + Công thức 2: Nuôi cấy nấm B. maydis trên môi trƣờng PCGA + Công thức 3: Nuôi cấy nấm B. maydis trên môi trƣờng CGA
* Chỉ tiêu theo dõi: Đƣờng kính tản nấm (mm) sau 1, 2, 3, 4, 5 ngày để đánh giá sự phát triển của nấm trên các môi trƣờng nuôi cấy nhân tạo.
3.6.5. Đánh giá tính gây bệnh củ loài nấm B. maydis
- Chuẩn bị nguồn nấm lây nhiễm bệnh: các isolate nấm B. maydis.
- Chuẩn bị cây ký chủ lây bệnh: các giống ngô HN88, LVN4, LVN99. - Giai đoạn sinh trƣởng: cây ngô ở giai đoạn 3-7 lá thật (khoảng 30 - 45 ngày sau gieo trồng).
- Vị trí lây nhiễm: Đối với nấm B. maydis lây nhiễm trên phiến lá. - Phƣơng pháp lây bệnh:
+ Dùng que đột nấm có kích thƣớc 3mm đột nấm Bipolaris maydis trên đĩa petri.
+Dùngkim mũi mác đặt miếng thạch đã đột sẵn có chứa sợi nấm lên vị trí cần lây bệnh và dùng băng dính để cố định miếng thạch. Mỗi isolate lây 90 vết trên mỗi giống. Đảm bảo vị trí lây nhiễm luôn đủ ẩm. Mỗi công thức thực hiện 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là 10 vết lây nhiễm.
- Chỉ tiêu theo dõi: Theo dõi thời gian tiềm dục, số lƣợng vết phát bệnh.
Đo kích thƣớc vết bệnh (mm) sau lây nhiễm 3, 5, 7, 9 ngày.
3.6.6. Khảo sát hiệu lực đối kháng củ nấm Trichoderma viride đối với loài nấm B. maydis hại ngô trên môi trƣờng nhân tạo PGA
* Chúng tôi tiến hành thí nghiệm trên môi trƣờng PGA, ở nhiệt độ 280C ± 20C, gồm 4 công thức, mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần 1 đĩa petri:
+ CT 1 (đối chứng): Cấy riêng rẽ nấm B. maydis.
+ CT 2: Cấy nấm đối kháng T. viride trƣớc, sau 24h cấy nấm B. maydis.
+ CT 3: Cấy đồng thời nấm B. maydis với nấm đối kháng T. viride. + CT 4: Cấy nấm B. maydis trƣớc, sau 24h cấy nấm đối kháng T. viride. * Chỉ tiêu theo dõi: Đo đƣờng kính tản nấm (mm) của nấm B. maydis và tính hiệu lực ức chế của nấm T. viride với nấm B. maydis trên môi trƣờng PGA sau 1, 2, 3, 4 ngày cấy.
Hình 3.3. Sơ đồ thí nghiệm khảo sát hiệu lực đối kháng củ nấm T. viride với nấm gây bệnh B. maydis
3.6.7. Khảo sát hiệu lực đối kháng củ vi khuẩn Bacillus subtilis đối với loài nấm B.m ydis hại ngô trên môi trƣờng nhân tạo PGA
Chúng tôi tiến hành thí nghiệm trên môi trƣờng PGA, ở nhiệt độ 280C ± 20C, gồm 4 công thức mỗi công thức nhắc lại 3 lần, mỗi lần 1 hộp petri:
Công thức 1(đối chứng): Cấy nấm B. maydis riêng rẽ trên môi trƣờng PGA.
Công thức 2: Cấy vi khuẩn B. subtilis trƣớc, sau 24h cấy nấm B. maydis.
Công thức 3: Cấy đồng thời nấm B. maydis với vi khuẩn B. subtilis.
Công thức 4: Cấy nấm B. maydis trƣớc, sau 24h cấy vi khuẩn B. subtilis. * Chỉ tiêu theo dõi: Đo đƣờng kính tản nấm B. maydis (mm) và tính hiệu lực ức chế của vi khuẩn B. subtilis với nấm B. maydis trên môi trƣờng nhân tạo PGA sau 1, 2, 3, 4, 5 ngày.
Hình 3.4. Sơ đồ thí nghiệm khảo sát HLĐK củ vi khuẩn Ba.subtilis
với nấm B. maydis
3.7. CÁC CHỈ TIÊU THEO DÕI, ĐÁNH GIÁ
- Tỷ lệ bệnh (%)
A
TLB (%) = x 100 B
Trong đó:
A là tổng số lá (cây) bị bệnh B là tổng số lá (cây) điều tra
- Chỉ số bệnh (%) Σ (a x b) CSB(%) = x 100 N x T Trong đó : a: Số lá bị bệnh ở mỗi cấp b: Số lá bị bệnh ở cấp tƣơng ứng
T: Cấp bệnh cao nhất trong bảng phân cấp bệnh N: Tổng số lá điều tra
- Hiệu lực ức chế % (HLƯC) của nấm T. viride (hoặc vi khuẩn B. subtilis) với nấm B. maydis.
C - T HLƢC (%) = x 100 C Trong đó: HLƢC là hiệu lực ức chế (%). C: đƣờng kính tản nấm (mm) ở công thức đối chứng. T: đƣờng kính tản nấm (mm) ở các công thức thí nghiệm.
PHẦN 4 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1. ĐIỀU TRA THÀNH PHẦN BỆNH NẤM CHÍNH HẠI NGÔ TẠI XÃ MINH TÂN, HUYỆN LƢƠNG TÀI, TỈNH BẮC NINH
Trên cây ngô có rất nhiều loài nấm gây hại khác nhau, để khảo sát thành phần, mức độ phổ biến của các bệnh do nấm gây ra trên ngô, chúng tôi tiến hành điều tra thành phần bệnh nấm chính hại ngô vụ xuân hè tại xã Minh Tân, huyện Lƣơng Tài, tỉnh Bắc Ninh trên các giống ngô đƣợc trồng tại đây. Điều tra định kì 7 ngày một lần theo quy chuẩn kĩ thuật quốc gia về phƣơng pháp điều tra, phát hiện dịch hại cây ngô (QCVN 01-167/2014 : BNNPTNT) thu đƣợc kết quả ở bảng 4.1.
Bảng 4.1. Thành phần bệnh chính hại ngô vụ xuân hè tại xã Minh Tân, huyện Lƣơng Tài, tỉnh Bắc Ninh.
STT Tên bệnh Giai đoạn cây bị bệnh Bộ phận bị hại Mức độ gây hại Tên Vệt N m Tên kho học
1 Đốm lá nhỏ Bipolaris maydis 3-4 lá Lá +++
2 Đốm lá lớn Exserohilum turcicum 7-8 lá Lá ++
3 Khô vằn Rhizoctonia solani 8-10 lá Thân,bẹ lá +
4 Gỉ sắt Puccinia maydis 9-10 lá Lá +++
Ghi chú: + Bệnh nhẹ TLB < 5%; ++ Bệnh trung bình TLB 5-10%; +++ Bệnh nặng TLB > 10%
Qua bảng 4.1 chúng tôi thấy: thành phần bệnh chính hại ngô vụ xuân hè tại xã Minh Tân phong phú, giai đoạn bị bệnh, bộ phận bị hại và mức độ gây hại giữa các bệnh là khác nhau. Bệnh xuất hiện từ khi cây đƣợc 3 - 4 lá cho đến khi thu hoạch, chủ yếu bệnh gây hại nhiều trên lá từ giai đoạn cây 5 - 6 lá đến 8 - 10 lá. Bệnh gây hại trên khắp các bộ phận của cây từ lá, bẹ lá, thân, bắp, áo bắp,... Bệnh gây hại nặng điển hình là bệnh đốm lá nhỏ, bệnh xuất hiện sớm nhất khi cây ngô đƣợc 3 - 4 lá và tồn tại trong suốt quá trình sinh trƣởng, phát triển của cây ngô, bệnh hại chủ yếu ở lá và một phần ở bẹ lá. Tiếp đến bệnh gỉ sắt cũng là một bệnh gây hại nhiều cho cây ngô, bệnh hại chủ yếu ở lá, mặc dù bệnh xuất hiện muộn hơn nhƣng khả năng gây hại của bệnh lớn hơn so với bệnh đốm lá lớn và bệnh đốm lá nhỏ vì nấm gây hại tấn công, xâm nhập và làm chết tế bào lá, làm cho lá bị khô, chết hoại, mất khả năng quang hợp. Bệnh đốm lá lớn xuất hiện sau bệnh đốm lá nhỏ, giai đoạn cây 5 - 6 lá bệnh bắt đầu xuất hiện và gây hại mạnh
cho đến cuối vụ. Bệnh khô vằn xuất hiện vào giai đoạn cây 8 - 10 lá gây hại chủ yếu ở bẹ lá, thân nhiễm với mức độ trung bình trên đồng ruộng.
A B
C D
Hình 4.1. Thành phần bệnh chính hại ngô vụ xuân hè tại xã Minh Tân, huyện Lƣơng Tài, tỉnh Bắc Ninh.
Ghi chú: A: Bệnh đốm lá nhỏ ngô (Bipolaris maydis)
C: Bệnh gỉ sắt ngô (Puccinia maydis)
B: Bệnh đốm lá lớn ngô (Exserohilum turcicum)
D: Bệnh khô vằn ngô (Rhizoctonia solani).
4.2. TÌNH HÌNH PHÁT SINH, PHÁT TRIỂN GÂY HẠI CỦA BỆNH ĐỐM LÁ NHỎ (Bipolaris maydis) TRÊN NGÔ VỤ XUÂN HÈ TẠI HUYỆN LƢƠNG TÀI, TỈNH BẮC NINH
4.2.1. Tình hình phát sinh, phát triển gây hại củ bệnh đốm lá nhỏ ngô ở một số đị phƣơng khác nh u tại huyện Lƣơng Tài
Điều tra diễn biến bệnh đốm lá nhỏ hại ngô nếp HN88 ở các vùng trồng ngô vụ xuân hè tại huyện Lƣơng Tài ta đƣợc bảng 4.2 và đồ thị 4.1.
Bảng 4.2. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) hại ngô nếp HN88 ở các vùng trồng ngô vụ xuân hè tại huyện Lƣơng Tài
Ngày
điều tr Gi i đoạn
Minh Tân L i Hạ Trung Kênh TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) 11/2 Cây con - - - - 18/2 3-4 lá 5,68 0,63 5,2 0,44 3,33 0,37 25/2 5-6 lá 12,32 1,45 8,03 1,22 6,9 1,07 3/3 7-8 lá 19,15 3,19 16,93 2,47 14,58 2,26 10/3 Xoáy nõn 23,33 4,07 21,36 3,8 20,34 3,69 17/3 Trỗ cờ, phun râu 22,57 3,4 18,84 3,19 16,29 2,63 24/3 Tung phấn, thụ tinh 20,29 2,83 16,28 2,52 14,29 2,22 31/3 Chín sữa 17,77 2,71 14,49 2,32 12,64 2,09 7/4 Chín sáp 15,76 2,45 12,75 2,13 11,24 1,81
Đồ thị 4.1. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ hại ngô nếp HN88 ở các vùng trồng ngô vụ xuân hè tại huyện Lƣơng Tài
Qua bảng 4.2 cho thấy: Ở các vùng khác nhau thì diễn biến bệnh đốm lá nhỏ ngô (Bipolaris maydis) trên giống ngô HN88 là khác nhau. Bệnh phát sinh và gây hại tăng dần từ giai đoạn 3 - 4 lá đến xoáy nõn, sau đó bệnh giảm dần. Bệnh hại nặng nhất ở giai đoạn 7 - 8 lá đến xoáy nõn. Bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) gây hại trên giống ngô HN88 cao nhất ở vùng đất xã Minh Tân với TLB 23,33%,
CSB 4,07%; ở vùng Lai Hạ, vùng đất Trung Kênh bệnh đốm lá nhỏ ngô (Bipolaris maydis) gây hại trên giống ngô HN88 là thấp hơn.
Do đó ở các vùng khác nhau bệnh đốm lá nhỏ ngô (Bipolaris maydis) gây hại khác nhau nguyên nhân là do chế độ chăm sóc, nguồn bệnh từ vụ trƣớc để lại, bệnh đi theo hạt giống,...
4.2.2. Tình hình phát sinh, phát triển gây hại củ bệnh đốm lá nhỏ ngô trên một số nền luân c nh khác nh u tại huyện Lƣơng Tài.
Điều tra diễn biến bệnh đốm lá nhỏ hại ngô nếp HN88 vụ xuân hè ở các chế độ luân canh khác nhau đƣợc trồng tại xã Minh Tân thể hiện ở bảng 4.3 và đồ thị 4.2.
Bảng 4.3. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) hại ngô nếp HN88 ở các chế độ luân canh khác nhau vụ xuân hè 2017 tại xã Minh Tân
Ngày điều tra Gi i đoạn Lúa – Ngô – Ngô Lúa- Cải bắp –
Ngô Lúa- Lúa -Lgô TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) 11/2 Cây con - - - - 18/2 3-4 lá 5,68 0,63 5,26 0,58 4,44 0,49 25/2 5-6 lá 13,04 2,75 9,49 1,38 8,97 1,23 3/3 7-8 lá 19,68 3,19 18,52 2,64 17,19 2,49 10/3 Xoáy nõn 24,29 3,97 22,22 3,64 19,17 2,56 17/3 Trỗ cờ, phun râu 21,58 3,16 20,26 3 14,86 2,31 24/3 Tung phấn, thụ tinh 18,68 2,6 16,1 2,42 13,51 2,1 31/3 Chín sữa 16,27 2,46 14,47 2,25 11,43 1,97 7/4 Chín sáp 15,7 2,37 13,16 2,11 10,29 1,68
Qua số liệu điều tra ở bảng 4.3 và đồ thị 4.2 chúng tôi nhận thấy: bệnh đốm lá nhỏ ngô phát sinh sớm ngay từ đầu vụ cho đến cuối vụ, ở các chế độ luân canh khác nhau có ảnh hƣởng đến diễn biến của bệnh là khác nhau. Đối với công thức luân canh lúa – ngô – ngô thì bệnh phát sinh, gây hại lớn nhất TLB là 24,29%, CSB là 3,97%; ở các chế độ luân canh lúa – cải bắp - ngô, lúa – lúa – ngô thì mức độ nhiễm bệnh thấp hơn.
Vì vậy việc áp dụng biện pháp luân canh phù hợp cũng là cách tốt để giảm thiểu nguồn bệnh đốm lá nhỏ ngô tích lũy lây lan và gây hại của bệnh.
Đồ thị 4.2. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) hại ngô nếp HN88 ở các chế độ luân c nh khác nh u vụ xuân hè 2017 đƣợc trồng tại xã Minh Tân 4.2.3 Tình hình phát sinh, phát triển gây hại củ bệnh đốm lá nhỏ ngô trên một số giống ngô khác nh u tại xã Minh Tân, huyện Lƣơng Tài
Điều tra diễn biến bệnh đốm lá nhỏ trên các giống ngô khác nhau vụ xuân hè tại xã Minh Tân thể hiện ở bảng 4.4 và đồ thị 4.3.
Bảng 4.4. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) hại ngô trên các giống khác nhau vụ xuân hè 2017 tại xã Minh Tân
Ngày điều tra Gi i đoạn HN88 LVN99 LVN4 TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) 11/2 Cây con - - - - 18/2 3-4 lá 6,82 0,76 6,58 0,73 4,44 0,49 25/2 5-6 lá 13,77 1,61 12,41 1,54 10,34 1,46 3/3 7-8 lá 21,81 3,72 19,45 2,7 16,67 2,49 10/3 Xoáy nõn 25,33 4,44 23,05 3,99 20,34 2,94 17/3 Trỗ cờ, phun râu 24 3,62 19,71 3,29 14,29 2,1 24/3 Tung phấn, thụ tinh 21,43 2,95 15,41 2,45 13,43 2,13 31/3 Chín sữa 17,19 2,64 13,91 2,25 12,36 1,69 7/4 Chín sáp 14,33 2,29 11,59 1,99 11,24 1,81
Đồ thị 4.3. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) hại ngô trên các giống khác nh u vụ xuân hè 2017 đƣợc trồng tại xã Minh Tân
Qua số liệu điều tra ở bảng 4.4 và đồ thị 4.3 chúng tôi nhận thấy: Ở các giống ngô khác nhau bệnh đốm lá nhỏ ngô phát sinh, gây hại là khác nhau. Bệnh đốm lá nhỏ ngô phát sinh gây hại trên giống ngô HN88 là cao nhất, bệnh suất hiện sớm khi ngô có 3 - 4 lá, bệnh tăng dần khi ngô có 5 - 6 lá đến chín sữa, chín sáp, tỷ lệ bệnh là 25,33 % chỉ số bệnh là 4,44 %; ở các giống ngô LVN99 và giống LVN4 có tỷ lệ bệnh thấp hơn. Do đó khi gieo trồng ngô để hạn chế bệnh đốm lá nhỏ ngô gây hại, chúng ta nên sử dụng giống có khả năng kháng bệnh để hạn chế bệnh gây hại trên diện rộng.
4.2.4. Ảnh hƣởng củ lƣợng bón phân urê khác nh u đến tình hình bệnh đốm lá nhỏ hại ngô vụ xuân hè 2017 tại Minh Tân
Điều tra diễn biến bệnh đốm lá nhỏ hại ngô nếp HN88 ở các chế độ phân bón khác nhau vụ xuân hè đƣợc trồng tại xã Minh Tân (bảng 4.5 và đồ thị 4.4)
Qua số liệu điều tra ở bảng 4.5 và đồ thị 4.4 chúng tôi nhận thấy: ở chế độ bón phân khác nhau bệnh đốm lá nhỏ ngô (Bipolaris maydis) phát sinh, gây hại là khác nhau. Bệnh đốm lá nhỏ ngô phát sinh gây hại ở chế độ bón phân 14 kg ure/sào là cao nhất tỷ lệ bệnh là 26,0% chỉ số bệnh là 4,37%; ở chế độ bón phân 6 kg ure/ sào có tỷ lệ bệnh là 23,73 %, chỉ số bệnh là 3,11 %, thấp nhất ở chế độ bón phân 10 kg ure/sào với tỷ lệ bệnh là 22,14% và chỉ số bệnh là 3,62%.
Bảng 4.5. Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ (Bipolaris maydis) hại ngô nếp HN88 ở chế độ phân bón khác nhau vụ xuân hè 2017 tại xã Minh Tân
Ngày điều
tra
Gi i đoạn
14 kg ure/sào 10 kg ure/sào 6 kg ure/sào TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) 11/2 Cây con - - - - 18/2 3-4 lá 7,95 0,88 5,56 0,62 6,58 0,73 25/2 5-6 lá 16,67 1,85 10,34 1,46 12,41 1,7 3/3 7-8 lá 22,34 3,55 17,14 2,55 19,58 2,76 10/3 Xoáy nõn 26 4,37 22,14 3,62 23,73 3,92 17/3 Trỗ cờ, phun râu 23,14 3,46 17,14 2,73 20,29 3,22 24/3 Tung phấn, thụ tinh 20,86 2,89 15,71 2,38 17,73 2,68 31/3 Chín sữa 18,62 2,8 14,04 2,24 15,94 2,48 7/4 Chín sáp 13,75 2,23 12,64 1,97 12,75 2,13
Đồ thị 4.4: Diễn biến bệnh đốm lá nhỏ hại ngô nếp HN88 ở chế độ phân bón khác nh u vụ xuân hè 2017 tại xã Minh Tân
Do đó khi gieo trồng ngô để hạn chế bệnh đốm lá nhỏ ngô (Bipolaris maydis) gây hại, chúng ta nên có chế độ phân bón hợp lý, không bón quá nhiều hay quá ít phân đạm.
4.2.5 Ảnh hƣởng củ trồng xen đến tình hình bệnh đốm lá nhỏ hại ngô vụ xuân hè 2017 tại Minh Tân