3.5.2.1. Nghiên cứu triệu chứng lâm sàng theo nghiên cứu mô tả ca bệnh
(Nguyễn Như Thanh và cs., 2001).
Chọn gà bệnh đã được phát hiện từ các trại nghiên cứu để nghiên cứu triệu chứng lâm sàng.
Thí nghiệm 1: Xác định thành phần giống ký sinh trùng đường máu.
+ Trong huyện chọn 3 xã, mỗi xã chọn 3 trại gà nuôi theo hình thức chuồng nuôi hở.
Mỗi trại lấy máu của 320 gà thuộc 3 độ tuổi: dưới (<) 7 tuần tuổi; 7 đến (=) 18 tuần tuổi và trên (>) 18 tuần tuổi.
Số lượng gà kiểm tra được phân bổ đồng đều cho từng tháng trong năm. Lấy máu ở tĩnh mạch cánh của gà và làm tiêu bản máu dàn, tiêu bản máu
được nhuộm bằng thuốc giemsa và kiểm tra phát hiện Ký sinh trùng đường máu tại phòng thí nghiệm bộ môn Ký sinh trùng, khoa Thú y, trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội.
+ Chỉ tiêu theo dõi: Giống ký sinh trùng ký sinh trong máu gà, tỷ lệ nhiễm Ký sinh trùng của gà tại các địa điểm nghiên cứu, tuổi gà nhiễm ký sinh trùng, mùa vụ gà mắc bệnh.
Thí nghiệm 2: Theo dõi triệu chứng lâm sàng của gà mắc bệnh ký sinh trùng đường máu
Tại mỗi trại gà nghiên cứu, chọn 10 gà đã phát bệnh đã được chẩn đoán mắc bệnh ký sinh trùng đường máu. Nghiên cứu triệu chứng lâm sàng qua quan sát các dấu hiệu xuất hiện trên gà bệnh, mô tả và chụp ảnh.
Các chỉ tiêu theo dõi: trạng thái, lông, da, ăn uống, vận động, trạng thái thần kinh, phân, mào, da.
3.5.2.2. Nghiên cứu bệnh tích đại thể và bệnh tích vi thể theo nghiên cứu mô tả ca bệnh (Nguyễn Như Thanh và cs., 2001)
Chọn gà bệnh đã được chẩn đoán mắc bệnh ký sinh trùng đường máu để nghiên cứu bệnh tích đại thể và vi thể
Thí nghiệm 3: Theo dõi bệnh tích của gà mắc bệnh ký sinh trùng đường máu
Tại mỗi trại nghiên cứu chọn 10 gà bệnh đã được chẩn đoán mắc bệnh ký sinh trùng đường máu đang phát bệnh. Nghiên cứu bệnh tích đại thể qua mổ khám gà quan sát các dấu hiệu xuất hiện trên các cơ quan bộ phận của gà, mô tả và chụp ảnh.
Chỉ tiêu theo dõi: Biến đổi của các cơ quan như: Da, cơ, hệ tiêu hóa, bai tiết, hô hấp, tuần hoàn và thần kinh.
Qua mổ khám, thu thập những bộ phận có bệnh tích điển hình bảo quản trong formon 10% và làm tiêu bản vi thể.
Chỉ tiêu theo dõi: Biến đổi ở mức độ tế bào của các bộ phận của gà bị mắc bệnh ký sinh trùng đường máu.
3.5.2.3. Nghiên cứu các chỉ tiêu sinh lý máu của gà mắc bệnh ký sinh trùng
đường máu của và gà khỏe theo nghiên cứu mô tả ca bệnh (Nguyễn Như
Lấy máu gà bệnh đã được xác định mắc bệnh ký sinh trùng đường máu qua tiêu bản máu dàn nhuộm giemsa và máu của gà khỏe để nghiên cứu biến đổi các chỉ tiêu sinh lý máu của gà.
Phân tích chỉ tiêu máu gà bị bệnh
Mỗi trại chọn 10 gà bệnh đã được xác định mắc bệnh ký sinh trùng đường máu qua tiêu bản máu dàn nhuộm giemsa, 10 gà khỏe để nghiên cứu các chỉ tiêu sinh lý máu.
Máu gà được lấy từ tĩnh mạch cánh vào các buổi sáng, giữ trong ống đựng máu tiêu chuẩn đã chứa sẵn chất chống đông được phân tích trên máy phân tích máu.
Chỉ tiêu theo dõi: Số lượng hồng cầu, tỷ khối huyết cầu, hàm lượng Haemoglobin, thể tích bình quân của hồng cầu. Số lượng bạch cầu và công thức bạch cầu của gà bị bệnh ký sinh trùng đường máu và không mắc bệnh ký sinh trùng đường máu.
3.5.2.4. Thử nghiệm thuốc điều trị theo nghiên cứu thực nghiệm
Chọn gà đã được chẩn đoán mắc bệnh ký sinh trùng đường máu qua tiêu bản máu dàn nhuộm giemsa, những gà ở giai đoạn phát bệnh, thử nghiệm điều trị với thuốc chống ký sinh trùng đường máu ở gà.
Thí nghiệm 4: Thử nghiệm thuốc điều trị bệnh ký sinh trùng đường máu trên gà bệnh
Thí nghiệm được tiến hành trên 3 trại gà có nhiều gà mắc bệnh ký sinh trùng đường máu đã được chẩn đoán qua kiểm tra máu. Dự kiến số lượng gà bệnh được thử nghiệm điều trị là 540 (mỗi trại 180 con) gà được thu thập và phân làm 3 lô, mỗi lô 60 gà tương ứng với 3 loại thuốc đang có trên thị trường là Methocin, Nanococcis do công ty Nanovet cung cấp và Daimenton do công ty thuốc thú y toàn cầu cung cấp.
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ hiệu lực của thuốc trong điều trị, phản ứng phụ của thuốc và thời gian tái phát bệnh sau điều trị.
4.5.2.5. Kỹ thuật và phương pháp nghiên cứu
- Xét nghiệm ký sinh trùng bằng kỹ thuật phiết kính máu gà và nhuộm bằng thuốc nhuộm giemsa (Trịnh Văn Thịnh, 1963).
Schmidt and Larry S. Roberts (2009), Trịnh văn Thịnh (1963).
Các giống ký sinh trùng được phát hiện qua tiêu bản máu nhuộm giemsa soi dưới kính hiển vi độ phóng đại 1000 lần. Phân loại ký sinh trùng tới giống dựa vào các đặc điểm hình thái của ký sinh trùng trong hồng cầu và bạch cầu và hình thái của hồng cầu, bạch cầu bị nhiễm ký sinh trùng qua các tiêu chí phân biệt sau:
Giống đơn bào Đặc trưng xuất hiện trên tiêu bản máu nhuộm
Haemoproteus 1. Gametocytes chỉ hiện diện trong hồng cầu
- Gametocytes có xuất hiện “hình dây” với dịch chuyển nhỏ của
hạt nhân chủ
- Thể phân liệt không nhìn thấy trên phết tế bào máu - Nhiều sắc tố màu nâu (hemozoin) có mặt trong hồng cầu
Plasmodium 1. Merozoites, phân liệt hoặc Gametocytes có thể được nhìn thấy
trong hồng cầu, có thể làm dịch chuyển nhân hồng cầu
- Merozoites có một vòng nhẫn
- Phân liệt là vòng bao gồm hình bầu dục có chứa Merozoites
- Gametocytes có xuất hiện một dây hình tương tự như
Hemoproteus nhưng hạt sắc tố màu vàng nâu là ít hơn
2. Ký sinh trùng cũng có thể được tìm thấy trong các tế bào khác bao gồm Thrombocytes, bạch cầu và các tế bào nội mô.
Leucocytozoon 1. Gametocytes làm sưng, làm biến dạng hồng cầu và bạch cầu bị
nhiễm.
- Bạch cầu sưng to có hình giống như quả bóng đá - Hồng cầu vót nhọn và kéo dài ở 2 đầu
- Không có hạt sắc tố trong hồng cầu
Trypanosoma 1. Ký sinh trùng ở ngoài hồng cầu
- Trypanosoma có hình thoi, bắt màu xanh lơ, nguyên sinh chất
bắt màu tím.
Hình 3.1. Hồng cầu nhiễm Leucocytozoon Hình 3.2. Hồng cầu nhiễm Haemoproteus Hình 3.3. Hồng cầu nhiễm Plasmodium spp. Hình 3.4. Máu nhiễm Trypanosoma spp.
- Cường độ nhiễm ký sinh trùng được xác định qua số lượng hồng cầu nhiễm bệnh và số lượng hồng, bạch cầu trung bình trong 3 vi trường kính hiển vi ở độ phóng đại 1000 lần trên tiêu bản máu. Dựa trên cơ sở khoa học gà phát bệnh khi trong vi trường kính hiển vi ở độ phóng đại 1000 lần có 4 đến 6 hồng cầu hoăc 4 – 6 tiên mao trùng nhiễm ký sinh trùng (Phạm Sỹ Lăng và cs., 2011) chúng tôi xếp thành 3 mức nhiễm sau:
+ Trung bình 1 vi trường kính hiển vi có 1 hồng cầu nhiễm hoặc 1 tiên mao trùng được coi là nhiễm nhẹ và ký hiệu: (+).
+ Trung bình 1 vi trường kính hiển vi có 2 đến 3 hồng cầu nhiễm hoặc 2 đến 3 tiên mao trùng được coi là nhiễm trung bình và ký hiệu: (+ +).
+ Trung bình 1 vi trường kính hiển vi có từ 4 đến 6 hồng cầu nhiễm hoặc 4 đến 6 tiên mao trùng được coi là nhiễm nặng và ký hiệu là (+ + +).
- Triệu chứng lâm sàng của gà bệnh được xác định qua quan sát trực tiếp gà bệnh, thu lượm thông tin, mô tả và chụp ảnh.
- Bệnh tích đại thể xác định qua mổ khám gà bệnh, quan sát, mô tả và chụp ảnh.
- Bệnh tích vi thể xác định qua mổ khám gà bệnh, thu thập gan, lách, phổi theo phương pháp mổ khám từ tài liệu chuẩn ngành Thú Y.
- Làm tiêu bản vi thể theo phương pháp của Jones et al. (1969).
- Phân tích các chỉ tiêu huyết học của gà mắc bệnh bằng máy phân tích huyết học CD - 3700.
- Đánh giá sự biến động các chỉ tiêu máu gà bệnh và gà khỏe thông qua sự tăng hoặc giảm của các chỉ tiêu theo dõi giữa gà bệnh và gà khỏe.
- Thử nghiệm hiệu lực của thuốc qua thí nghiệm phân lô và so sánh - Đánh giá hiệu lực của thuốc qua tỷ lệ (%) gà khỏi bệnh