Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.2. Kết quả nghiên cứu xác định điều kiện sinh trưởng, phát triển sinh khối thích
4.2.1. Xác định điều kiện tối ưu để nhân sinh khối chủng nấm Beauveria bassiana đã
bassiana đã tuyển chọn
4.2.1.1. Kết quả thí nghiệm xác định thành phần môi trường thích hợp để nhân sinh khối Beauveria bassiana
Kết quả đánh giá lựa chọn thành phân môi trường nhân sinh khối nấm
Beauveria bassiana BX1 (bảng 4.5) cho thấy, trong 4 loại môi trường thì môi
trường MT4 với thành phần là gạo có bổ xung CaCO3 nồng độ 0,5 % cho lượng bào
tử cao nhất đạt 2,42 x 109 cfu/g sinh khối tươi và đạt 2,96 x 109 cfu/g sinh khối khô. Môi trường MT1 cho lượng bào tử thấp nhất, chỉ đạt 1,37x109 và 1,57x109 cfu/g trong sinh khối nấm tươi và sinh khối nấm khô sau 10 ngày nhân nuôi.
Kết quả thí nghiệm (bảng 4.5) còn nhận thấy trong các môi trường hỗn hợp từ các loại nguyên liệu rẻ tiền như ngô, cám, bột đậu lành, bã bia khô, bã đậu phụ, để nhân sinh khối nấm thì môi trường MT2 và MT3 với thành phần gồm: 60 gram cám gạo, 30 gram bột ngô nghiền mảnh và 10 gram bã bia khô hoặc 10 gram bột đậu nành cho lượng bào tử tương đối tốt đạt từ 2,35x 109- 2,37 x 109 cfu/g sinh khối khô, trong điều kiện nhiệt độ phòng thí nghiệm là 26,3 oC và ẩm độ 74,7%.
Bảng 4.5. Số lượng bào tử nấm B. bassiana BX1 sau 10 ngày nhân sinh khối trên các loại môi trường khác nhau (Viện BVTV, 2019)
Công thức
Môi trường
Lượng bào tử nấm sau 10 ngày nhân nuôi
T HR
Sinh khối tươi (x109 cfu/g)
Sinh khối khô (x109 cfu/g) I MT1 1,37d 1,57a 26,3 74,7 II MT2 2,18c 2,37b III MT3 2,12b 2,35b IV MT4 2,42a 2,96c CV% 0,5 0,9 LSD 0,05 0,211 0,394
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau đứng sau các chữ số chỉ sự sai khác có ý nghĩa theo phép thử của Duncan với độ tin cậy 95%.
MT1 : Bột ngô mảnh 80gram + bã đậu phụ 20gram
MT2 : Cám gạo 60 gram + bột ngô mảnh 30 gram + bã bia khô 10gram MT3 : Cám gạo 60 gram + bột ngô mảnh 30 gram + bột đậu nành 10 gram
Hình 4.7. So sánh số lượng bào tử nấm Beauveria bassiana BX1 sau 10 ngày nhân sinh khối trên các loại môi trường
Hình 4.8. Thí nghiệm xác định môi trường nhân sinh khối nấm
B.bassiana BX1 (Phòng TN, Viện BVTV, 2019)
4.2.1.2. Kết quả thí nghiệm xác định ngưỡng nhiệt độ thích hợp để nhân sinh khối Beauveria bassiana
Trong các yếu tố tác động đến sự phát triển của nấm thì nhiệt độ là yếu tố rất quan trọng. Vì vậy, cần tiến hành nuôi cấy sinh khối nấm B. bassiana ở các ngưỡng nhiệt độ khác nhau để xác định ngưỡng nhiệt độ thích hợp đối với loài nấm này.
Thí nghiệm đánh giá khả năng phát triển sinh khối và hình thành bào tử của nấm được tiến hành ở cùng điều kiện môi trường MT4 (Gạo hấp chín 200gram +
30 ml dung dịch CaCO3 0,5%) nhưng ở các nhiệt độ nuôi cấy khác nhau là 18oC, 20oC, 25oC, 30oC và 32oC. Kết quả kiểm tra mật độ bào tử nấm sau 10 ngày nhân sinh khối được trình bày trong bảng 4.6.
Bảng 4.6. Khả năng phát triển sinh khối tạo bảo tử trần của nấm B. bassiana
BX1 nuôi cấy ở các ngưỡng nhiệt độ khác nhau (Viện BVT, 2019)
Công thức
Ngưỡng nhiệt độ
Số lượng bào tử nấm sau 10 ngày nhân sinh khối
Sinh khối tươi (x109 cfu/g) Sinh khối khô (x109 cfu/g)
1 18oC 1,12b 1,34b 2 20oC 2,44c 2,97c 3 25 oC 2,47c 3,02c 4 30oC 1,05b 1,26b 5 32oC 0,02a 0,10a CV% 2,8 1,8 LSD 0,761 0,582
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau đứng sau các chữ số chỉ sự sai khác có ý nghĩa theo phép thử của Duncan với độ tin cậy 95%.
Hình 4.9. So sánh số lượng bào tử nấm Beauveria bassiana BX1 sau 10 ngày nhân sinh khối ở các ngưỡng nhiệt độ
Kết quả bảng 4.6 cho thấy, sinh khối nấm phát triển tốt nhất ở khoảng nhiệt
độ 20 - 25oC. Lượng bào tử hình thành sau 10 ngày nuôi cấy đạt ở ngưỡng nhiệt
độ này cho lượng bào tử tương đương nhau, đạt 2,44 x 109 - 2,47 x 109 cfu/g sinh khối tươi, đạt 2,97 x 109 - 3,02 x 109 cfu/g sinh khối khô sau 10 ngày nuôi cấy. Còn ở nhiệt độ 18oC và 30 oC thì lượng bào tử hình thành đều thấp chỉ đạt tương ứng 1,05 x 109 – 1,12 x 109 cfu/g sinh khối tươi, đạt 1,26 x 109 – 1,34 x 109 cfu/g sinh khối khô. Đặc biệt, ở ngưỡng nhiệt độ 32oC lượng bào tử hình thành rất thấp ở sinh khối khô (0,10 x 109cfu/g), trong sinh khối nấm hầu như chỉ hình thành hệ sợi bết vào nhau thành tảng lớn.
Như vậy, ngưỡng nhiệt độ tối ưu để nhân sinh khối nấm B. bassiana là từ
20oC đến 25oC.
4.2.1.3. Kết quả xác định điều kiện pH môi trường nuôi cấy nấm Beauveria bassiana
Thí nghiệm tiến hành trên môi trường PDA với 5 mức pH khác nhau, gồm các mức 5,5; 6,0; 6,5; 7,0 và 7,5. Mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc là 1 đĩa petri chứa môi trường PDA được cấy nấm vào theo phương pháp chấm điểm ở tâm đĩa. Đĩa nuôi cấy nấm được đặt trong điều kiện phòng thí nghiệm.
Kết quả theo dõi sự phát triển của tản nấm nấm ở các mức pH khác nhau được trình bày ở bảng 4.7.
Bảng 4.7. Khả năng phát triển của chủng nấm Beauveria bassiana BX1 trong các điều kiện pH môi trường khác nhau (Viện BVTV, 2018)
Công thức
PH Môi trường
Đường kính tản nấm sau các ngày
nuôi cấy trên môi trường PDA(cm) T TB HR TB 3 ngày 5 ngày 7 ngày 10 ngày I 5,5 0,63 1,55a 2,01a 3,50 a 24,8 72,6 II 6,0 0,75 2,43b 3,75b 4,25b III 6,5 0,76 2,48b 3,67b 4,21b IV 7,0 0,57 1,17c 2,30c 3,49c V 7,5 0,51 0,77d 1,47d 3,17d CV% 1,7 1,6 1,7 LSD 0,05 0,531 0,785 0,117
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau đứng sau các chữ số chỉ sự sai khác có ý nghĩa theo phép thử của Duncan với độ tin cậy 95%.
Hình 4.10. Đường kính tản nấm B. bassiana BX1 sau các ngày nuôi cấy trên môi trường PDA (cm) trong các ngưỡng điều kiện pH môi trường
A B
C
Hình 4.11. Khả năng phát triển của chủng nấm B. bassiana BX1 trong điều kiện môi trường pH = 6 sau A: 3, B: 5, C: 10 ngày nuôi cấy
Kết quả thí nghiệm (bảng 4.7) cho thấy chủng nấm B. bassiana BX1có khả năng phát triển ở biên độ pH rộng từ 5,5 - 7,5 với đường kính tản nấm từ 3,17 - 4,25 cm sau 10 ngày nuôi cấy. Ở tất cả các mức pH thí nghiệm, sau 3 ngày nuôi cấy hầu như nấm phát triển chậm, đường kính tản nấm đều dưới 1 cm. Sau 5 ngày, 7 ngày nấm phát triển nhìn thấy rõ hơn. Trong các mức pH thử nghiệm thì mức pH môi trường từ 6,0 - 6,5 là thích hợp nhất cho nấm B. bassiana sinh trưởng, phát triển, đường kính tản nấm sau 10 ngày nuôi cấy đạt từ 4,21 - 4,25 cm. Khi pH môi trường là 5,5 và 7,0 thì nấm sinh trưởng chậm hơn, đường kính tản nấm chỉ đạt tương ứng là 3,50 cm và 3,49 cm, còn ở mức pH = 7,5 nấm sinh trưởng kém nhất chỉ đạt 3,17 cm sau 10 ngày nuôi cấy.
Kết quả của nghiên cứu của đề tài tương đồng với nghiên cứu trước đó của Phạm Văn Nhạ về nghiên cứu tạo chế phẩm sinh học phòng chống rệp sáp và nấm cộng sinh hại cà phê năm 2011. Theo Phạm Văn Nhạ (2011), pH môi trường để nấm B. bassiana phát triển tốt nhất từ 6,0 – 6,5.
4.2.1.4. Xác định ấm độ môi trường thích hợp nhân sinh khối nấm Beauveria bassiana
Thí nghiệm xác định ấm độ môi trường thích hợpđược bố trí nuôi cấy trên
300 gram thành phần của môi trường MT4 (Gạo hấp chín 200gram + 30 ml dung dịch CaCO3 0,5%) với 4 công thức tương ứng với 4 tỷ lệ lượng nước cho vào môi trường khác nhau.
Bảng 4.8. Khả năng sinh bào tử của nấm Beauveria bassiana BX1trong các ngưỡng ẩm độ khác nhau (Viện BVTV, 2019)
Công thức Lượng nước /300 g môi trường MT4 (ml) Lượng dịch giống nấm nuôi cấy (ml)
Số lượng bào tử sau 10 ngày
TTB HRTB Sinh khối tươi
(x 109 cfu/g) Sinh khối khô (x 109 cfu/g)
1 80 50 1,41a 1,55a 24,7 68,7 2 100 50 2,39b 2,55b 3 120 50 2,26b 2,51b 4 150 50 1,74a 1,89a CV% 1,2 1,3 LSD 0,05 0,47 0,55
Hình 4.12. So sánh khả năng sinh bào tử của nấm B. bassiana BX1ở các ngưỡng ẩm độ sau 10 ngày thí nghiệm
Kết quả thí nghiệm xác định lượng nước tối ưu để pha vào môi trường trường MT4 (bảng 4.8) cho thấy, hàm lượng nước có ảnh hưởng rõ rệt đối với số
lượng bào tử nấm B.bassiana BX1 hình thành sau 10 ngày nhân sinh khối. Biên
độ dao động của số lượng bào tử giữa các công thức pha với lượng nước khác nhau là từ 1,41 x 109 - 2,39 x 109 cfu/g sinh khối tươi, đạt 1,55 x 109 - 2,55 x 109 cfu/g sinh khối khô.
Trong số các công thức tương ứng với mức nước ban đầu pha vào môi
trường MT4 (Gạo hấp chín 200gram + 30 ml dung dịch CaCO3 0,5%) thì công
thức 80ml nước/300g môi trường cho lượng bào tử thấp nhất chỉ đạt 1,41 x 109
cfu/g sinh khối tươi và 1,55 x 109 cfu/g sinh khối khô.
Khi hàm lượng nước tăng lên mức 100 và 120ml /300 gram môi trường thì lượng bào tử nấm tăng tương đương nhau là 2,26 x 109 - 2,39 x 109 cfu/g sinh khối tươi và 2,51 x 109 - 2,55 x 109 cfu/g sinh khối khô.
Tuy nhiên khi tăng lượng nước lên mức 150ml nước/300 gram môi trường thì môi trường có hiện tượng bết dính nên nấm phát triển kém, lượng bào tử nấm giảm xuống còn 1,89 x 109 cfu/g sinh khối khô.
Như vậy lượng nước pha vào môi trường MT4 từ 100 - 120ml/300g môi trường là ngưỡng thích hợp nhất để sinh khối nấm B. bassiana phát triển.