sinh khối thích hợp nhất đối với nấm Beauveria bassiana BX1
3.5.2.1. Thí nghiệm xác định thành phần môi trường thích hợp
- Thí nghiệm tìm hiểu thành phần môi trường thích hơp để nhân sinh khối nấm B. bassiana được bố trí với 4 công thức tương ứng với 4 loại môi trường có thành phần cơ chất khác nhau. Cụ thể như sau:
MT1 : Bột ngô mảnh 80gram + bã đậu phụ 20gram
MT2 : Cám gạo 60 gram + bột ngô mảnh 30 gram + bã bia khô 10gram MT3 : Cám gạo 60 gram + bột ngô mảnh 30 gram + bột đậu nành 10 gram
MT4 : Gạo hấp chín 200gram + 30 ml dung dịch CaCO3 0,5%.
Mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là một túi nilon buộc kín bằng dây chun đựng môi trường nhân sinh khối nấm chứa các thành phần tương ứng theo các công thức thí nghiệm. Đem các túi môi trường hấp khử trùng ở 121ᵒC, 1.5 atm trong 120 phút, sau đó dùng tay bóp tơi môi trường rồi để nguội. Sử dụng que cấy gạt nấm trên bề mặt thạch trong các ống tuýp giống, cho vào túi môi trường, dùng tay bóp và lắc đều, đặt các túi nấm trong điều kiện phòng thí nghiệm.
- Chỉ tiêu theo dõi: số lượng bào tử /gram sinh khối tươi và khô sau 10 ngày nuôi cấy
Phương pháp đếm bào tử: Dùng buồng đếm hồng cầu và được tiến hành như sau: Nghiền 1 gram sinh khối nấm vào 10 ml nước cất và lắc đều, lấy 1 ml dịch bào tử vừa pha cho vào 9 ml nước cất, cứ hòa như vậy với tỷ lệ 1 ml dịch bào tử với 9 ml nước cất cho đến khi đếm được bào tử (10-4 – 10-6).
3.5.2.2. Thí nghiệm xác định ngưỡng nhiệt độ thích hợp để nhân sinh khối
- Thí nghiệm xác định nhiệt độ thích hợp để phát triển sinh khối nấm B. bassiana được bố trí với 5 công thức tương ứng với 5 ngưỡng nhiệt độ nuôi cấy khác nhau. Mỗi công thức tiến hành 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc là 1 túi nilon nuôi cấy nấm có khối lượng 200gr theo công thức môi trường MT4. Cụ thể như sau:
CT1: Nhân sinh khối nấm ở 18oC.
CT2: Nhân sinh khối nấm ở 20oC.
CT4: Nhân sinh khối nấm ở 30oC.
CT5: Nhân sinh khối nấm ở 32oC.
Đem các túi môi trường hấp khử trùng ở 121oC, 1.5 atm trong 120 phút, sau
đó dùng tay bóp tơi rồi để nguội. Sử dụng que cấy lấy thạch có chứa nấm B. bassiana trong các ống tuýp giống, cho vào túi môi trường, dùng tay bóp và lắc đều. Túi nấm được đặt trong tủ định ôn với các mức nhiệt độ tương ứng với các công thức.
- Chỉ tiêu theo dõi: số lượng bào tử /gram sinh khối tươi và khô sau 10 ngày nuôi cấy bằng buồng đếm hồng cầu.
3.5.2.3. Xác định độ pH môi trường thích hợp để nấm Beauveria bassiana phát triển
- Thí nghiệm xác định độ pH môi trường nuôi cấy thích hợp được bố trí trên muôi trường nuôi cấy PDA với 5 công thức tương ứng với 5 ngưỡng pH môi trường:
CT1: pH môi trường 5,5 CT2: pH môi trường 6,0 CT3: pH môi trường 6,5 CT4: pH môi trường 7,0 CT5: pH môi trường 7,5
Điều chỉnh pH môi trường nuôi cấy nấm bằng cách cho vào từng giọt dung dịch HCl nồng độ 0,1 M hoặc NaOH nồng độ 0,1 M. Sử dụng pH kế để xác định và điều chỉnh độ pH của môi trường ứng với các công thức thí nghiệm, sau đó
đặt môi trường đã chuẩn pH vào nồi hấp khử trùng ở 121oC, 1 atm, trong 30 phút
rồi tiến hành đổ môi trường ra đĩa petri. Khi môi trường nguội tiến hành kiểm tra lại độ pH của môi trường.
Mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc là 1 đĩa petri chứa môi trường PDA được cấy nấm vào theo phương pháp chấm điểm ở tâm đĩa. Đĩa nuôi cấy nấm được đặt trong điều kiện phòng thí nghiệm.
- Chỉ tiêu theo dõi: Đo đường kính tản nấm sau 3, 5, 7 và 10 ngày nuôi cấy.
3.5.2.4.Xác định ấm độ môi trường thích hợp nhân sinh khối nấm Beauveria bassiana
với 4 công thức tương ứng với 4 tỷ lệ lượng nước cho vào môi trường khác nhau: CT1: 80ml nước
CT2: 100ml nước CT3: 120ml nước CT4: 150ml nước
Mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại là một túi nilon chứa môi trường cộng với nước theo tỷ lệ tương ứng của các công thức. Gạo được hấp khử trùng ở nhiệt độ 121oC, áp suất 1.5atm trong 120 phút, sau đó bóp tơi để nguội.
Sử dụng que cấy lấy thạch có chứa nấm Beauveria bassiana trong các ống tuýp
giống, cho vào túi môi trường, dùng tay bóp và lắc đều. Túi nuôi cấy nấm được đặt trong điều kiện phòng thí nghiệm.
- Chỉ tiêu theo dõi: số lượng bào tử /gram sinh khối tươi và khô sau 10 ngày nuôi cấy bằng buồng đếm hồng cầu.