compozit của chúng với axit oleic trên mận Tam Hoa
3.3.1.1. Phương pháp thử nghiệm hoạt tính đối kháng nấm mốc của chitosan nano chitosan và compozit với axit oleic trên quả mận Tam Hoa
Thí nghiệm đánh giá hoạt tính đối kháng nấm mốc của chitosan, nano chitosan và compozit với axit oleic trên quả mận được thực hiện bằng phương pháp gây nhiễm nhân tạo trên bề mặt quả. Dịch bào từ nấm mốc được hoạt hóa bằng nước muối sinh lý sau 24h. Mỗi quả được gây xước 4 điểm, sau đó nhỏ 20 μl bào tử nấm mốc với mật độ 107 CFU vào vết xước. Để khô tự nhiên 12 h, sau đó nhỏ và xoa 200 μl một trong 4 dịch lỏng chitosan, nano chitosan, compozit chitosan với axit oleic và compozit nano chitosan với axit oleic vào vết xước rồi để khô tự nhiên. Sau đó đặt quả vào thùng giấy và bảo quản ở nhiệt độ thường, mỗi công thức được tiến hành trên 25 quả, nhắc lại 3 lần. Theo dõi tỷ lệ thối hỏng và vết xước nhiễm nấm sau 1, 3, 7 và 10 ngày bảo quản.
Bố trí thí nghiệm
CT1: Đối chứng (không xử lý) CT2: Chitosan (1,5%)
CT3: nano chitosan (1,5%)
CT4: compozit của chitosan với axit oleic 1,5% CT5: Compozit của nano chitosan với axit oleic 1,5%
3.3.1.2. Phương pháp đánh giá chất lượng vi sinh vật của mận xử lý bằng chitosan và biến thể của chitosan với thời gian xử lý khác nhau
a. Phương pháp bố trí thí nghiệm
Mận có độ chín 85% được lựa chọn có kích thước đồng đều, không bị tổn thương, sâu bênh, được rửa sạch bằng nước máy và để khô tự nhiên. Sau đó được xử lý bằng băng một trong 4 dịch lỏng (chitosan, nano chitosan, compozit của chitosan với axit oleic, compozit của nano chitosan với axit oleic nồng độ 3000 ppm), đối chứng (nhúng nước cất) sau các khoảng thời gian nhúng là 1 phút, 3 phút, 5 phút, để khô tự nhiên, xếp vào thùng catton để bảo quản ở nhiệt độ thường. Thí ngiệm được bố trí 15 công thức, mỗi công thức gồm 25 quả mận, nhắc lại 3 lần. Đánh giá một số chỉ tiêu về vi sinh vật: vi sinh vật tổng số, nấm men- nấm mốc. Thời gian theo dõi là sau 1, 3, 7, 10 ngày bảo quản.
b. Phương pháp xác định vi sinh vật hiếu khí tổng số
Lấy mẫu: mận được lấy mẫu 5 quả/1 công thức gọt phần vỏ quả, nghiền nhỏ bằng cối chày sứ, trộn đều, cân 1 gam mẫu, pha loãng tới nồng độ 10-2, 10-3 (thao tác không quá 30 phút).
Lấy 100μl mẫu đã pha loãng cấy trên đĩa petri có môi trường TGA (Tripton – Glucose – Agar) mỗi nồng độ pha loãng cấy 3 đĩa, sau đó nuôi trong tủ ấm ở 370C sau 48 đến 72 giờ, đếm tất cả khuẩn lạc xuất hiện trên đĩa thạch (số lượng khuẩn lạc trong mỗi đĩa từ 30 - 300 khuẩn lạc). Số lượng vi sinh vật trung bình trong 1g mẫu được tính theo công thức.
N khuẩn lạc/g hay ml = V f n n C 1 2 1 ) (
Trong đó ∑C: tổng số khuẩn lạc đếm được trên tất cả các đĩa n1:số đĩa đếm ở nồng độ pha loãng thứ nhất
f1: Hệ số pha loãng ở đĩa đếm thứ nhất V: thể tích mẫu cấy vào mỗi đĩa petri
Chú ý: Nếu ngay ở đĩa cấy mẫu nguyên chất (lỏng) hoặc dung dịch huyền phù gốc mà có số lượng khuẩn lạc ít hơn 30 khuẩn lạc thì vẫn lấy kết quả đó.
Công thức môi trường nuôi cấy TGA (Tripton – Glucose – Agar)
STT Thành phần Khối lượng 1 Pepton 5 g 2 Glucose 4 g 3 Cao nấm men 2,5g 4 Agar 15g Nước cất 1 lít c. Phương pháp xác định Nấm men – Nấm mốc
Phương pháp xác định nấm men – nấm mốc tương tự như phương pháp xác định vi sinh vật hiếu khí tổng số
Công thức môi trường xác định nấm men – nấm mốc YGC (Yeast – Clucose – Chloramphenicol) STT Thành phần Khối lượng 1 Glucose 20 g 2 Cao nấm men 5 g 3 Chloramphenicol 0,1g 4 Agar 20g Nước cất 1 lít