Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.2. Kết quả nghiên cứu một số đặc tính sinh học của chủng virus kty
4.2.2. Kết quả xác định hiệu giá virus qua các đời cấy chuyển
Sau khi lựa chọn được chủng virus PRRS dùng để nghiên cứu (bảng 4.3), chúng tôi tiến hành tìm hiểu đặc tính sinh học của chúng qua việc xác định hiệu giá virus. Chúng tôi chuẩn bị một khay 96 giếng đã phủ tế bào Marc-145 một lớp. Số lượng tế bào trong một giếng của khay được xác định bằng cách đếm 4 giếng đại diện ở 4 góc của khay 96 và tính trung bình. Huyễn dịch virus được pha loãng theo cơ số 10 rồi đem ủ trên bề mặt tế bào một lớp của các giếng theo thứ tự đánh dấu trước (25µl/giếng), mỗi độ pha loãng lặp lại 3 lần. Sau một giờ ủ, chúng tôi bổ sung vào mỗi giếng 100µl dung dịch duy trì DMEM có chứa 10% TBP. Để khay tế bào đã gây nhiễm virus trong tủ ấm 37°C/5% CO2.
Quan sát CPE qua các thời điểm 24, 36, 48, 60,….sau gây nhiễm. Sau đó, virus được thu hoạch và xác định TCID50 theo phương pháp của Reed-Muench.
* Đặc điểm sinh trưởng, phát triển của virus trên tế bào
Tại các thời điểm 24, 36, 48, 60, 72, 80, 96, 108, 120 giờ sau gây nhiễm tiến hành thu hoạch virus chủng KTY – PRRS – 04 đời P0. Dịch virus thu được tại mỗi thời điểm được trộn chung thành một mẫu đồng nhất để xác định hiệu giá. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần để có đánh giá trung bình. Kết quả được trình bày tại bảng 4.6.
Bảng 4.6. Hiệu giá của chủng virus KTY – PRRS – 04 tại các thời điểm thu hoạch
Thời điểm thu
virus (giờ) 24 36 48 60 72 84 96 108 120 Hiệu giá virus L1 104,5 104,5 105,7 106,5 106,7 104,6 104,3 103,8 103,5 L2 104,2 104,8 105,5 106,4 106,72 104,64 104,5 104,0 103,8 L3 103,99 104,5 105,6 106,2 106,8 104,5 104,2 103,7 103,6 TB 104,23 104,6 105,6 106,37 106,74 104,58 104,33 103,83 103,63
0 1 2 3 4 5 6 7 8 24 h 36 h 48 h 60 h 72 h 84 h 96 h 108 h 120 h L og h iệ u g iá v ir u s Lần 1 Lần 2 Lần 3 Trung bình
Thời gian thu virus Hình 4.6. Đường cong sinh trưởng của virus KTY – PRRS - 04
Qua bảng số liệu tại bảng 4.6 và đồ thị sinh trưởng, phát triển của virus PRRS chủng KTY – PRRS – 04 cho thấy: Sau gây nhiễm 24 giờ virus bắt đầu quá trình sinh trưởng, giá trị Log10TCID50//25µl trung bình đạt 4,23,hàm lượng virus phát triển tăng dần theo thời gian nhiễm và đạt cao nhất vào 72 giờ sau gây nhiễm, vào thời điểm này giá trị Log10TCID50//25µl trung bình đạt 6.74. Sau thời điểm 72 giờ, hiệu giá virus giảm nhanh chóng. Đến thời điểm 120 giờ sau gây nhiễm hiệu giá vi rút chỉ còn 103,63 TCID50/25µl.Từ đó chúng tôi rút ra kết luận thời điểm thu hoạch virus tốt nhất là 72 giờ sau khi gây nhiễm tế bào. Tại thời điểm này hàm lượng virus đạt cao nhất và hiệu giá virus ổn định nhất. Theo chúng tôi sở dĩ có sự suy giảm hàm lượng virus sau 72 giờ sau gây nhiễm nguyên nhân chủ yếu là do số lượng tế bào Marc-145 do virus PRRS phá hủy.
Kết quả nghiên cứu của chúng tôi về quá trình sinh trưởng và phát triển của chủng virus KTY – PRRS – 04 trên môi trường tế bào Marc-145 tương tự với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thu Trang (2015) về chủng virus PRRS nhược độc Hanvet1.Vn. Tuy nhiên, trong nghiên cứu của Nguyễn Thu Trang, tác giả cho biết khoảng thời gian virus Hanvet1.Vn sinh trưởng và phát triển mạnh nhất là 80 – 96 giờ sau gây nhiễm.
Kết quả nghiên cứu này phù hợp với nghiên cứu của Lê Thị Toan và cs. (2016) nghiên cứu về đặc tính sinh học của chủng virus KTY - PRRS – 05 phân
lập tại Việt Nam qua các đời cấy chuyển.
Theo công bố của Nguyễn Thị Lan và Lương Quốc Hưng (2012) lượng virus PRRS trong tế bào lên tục tăng mạnh sau 48 giờ sau gây nhiễm và đạt mức độ cao nhất ở 72 giời sau khi gây nhiễm, với giá trị log10 TCID50/25µl là 4,83 đời thứ nhất. Như vậy, kết quả nghiên cứu của chúng tôi là phù hợp với nghiên cứu của các tác giả nói trên.
* Hiệu giá của chủng virus KTY - PRRS – 04 qua các đời cấy chuyển
Kết quả về hiệu giá trung bình của chủng virus KTY - PRRS – 04 qua các đời cấy chuyển được trình bày ở bảng 4.7 và hình 4.7.
Bảng 4.7. Hiệu giá của chủng virus KTY - PRRS – 04 qua các đời cấy chuyển qua các đời cấy chuyển
Chủng virus Đời Hiệu giá virus TCID50/25µl
KTY-PRRS-04 P0 106,74 P10 106,26 P20 107,47 P30 106,48 P40 107,47 6.74 6.26 7.47 6.48 7.47 5.6 5.8 6 6.2 6.4 6.6 6.8 7 7.2 7.4 7.6
P1 P10 P20 P30 Log10 hiệu giáP40
virus
Đời cấy chuyển
Hình 4.7. Log10 hiệu giá của chủng virus KTY - PRRS – 04 qua các đời cấy chuyển
Qua bảng 4.7 và hình 4.7 cho thấy, hiệu giá virus trung bình thấp nhất được xác định là đời 10 có giá trị 106.26 TCID50/25µl; sau đó đến đời 30, đời 1 và
hiệu giá virus cao nhất được xác định là đời 20 và đời 40 với giá trị là 107.47. Sự chênh lệch về hiệu giá chủng virus KTY - PRRS – 04 qua các đời cấy chuyển là không đáng kể. Như vậy, chủng virus KTY - PRRS – 04 có hiệu giá tương đối cao, ổn định qua các đời cấy chuyển thể hiện qua sự chệnh lệch giá trị giữa các đời không đáng kể.
Theo Nguyễn Thu Trang (2015) hiệu giá virus nhược độc Hanvet1.Vn qua các đời cấy chuyển từ P1 – P10 dao động từ 106,37TCID50/ml - 106,63TCID50/ml. Theo chúng tôi có sự sai khác so với kết quả nghiên cứu của chúng tôi đưa ra là do chủng virus nhược độc Hanvet1.Vn có độc lực thấp hơn so với chủng virus KTY – PRRS – 04. Tuy nhiên, so sánh với kết quả nghiên cứu của Lê Thị Toan và cs. (2016) nghiên cứu về đặc tính sinh học của chủng virus KTY - PRRS – 05 phân lập tại Việt Nam qua các đời cấy chuyển thì kết quả chúng tôi đưa ra là hoàn toàn phù hợp.