L ỜI CẢM ƠN
1.8.2. Các phương pháp ELISA thường dùng
1.8.2.1. Phản ứng ELISA gián tiếp tìm kháng thể
Nguyên lý: Các giếng của khay nhựa được phủ sẵn kháng nguyên.
Kháng nguyên phải được gắn chặt vào khay nhựa sao cho sau khi rửa phải còn một lớp kháng nguyên phủ vào các giếng, nhỏ huyết thanh (cần kiểm tra) vào các giếng, nếu trong huyết thanh có kháng thể đặc hiệu thì kháng thể sẽ kết hợp với
kháng nguyên được pha sẵn trong giếng. Sau khi ủ và rửa để loại bỏ kháng thể
không gắn với kháng nguyên, kháng thể đã kết hợp với kháng nguyên được phát hiện bởi kháng thể đã được gắn enzyme, nhỏ cơ chất của enzyme làm đổi màu thành phần phản ứng. Độ đậm của màu sắc tỉ lệ với lượng kháng thể gắn enzyme
được gắn với kháng thể trong giếng, tức là tỷ lệ thuận với lượng kháng thể có trong huyết thanh. Kết quả của phản ứng được xác định bằng mắt thường hoặc bằng máy
đo quang phổ(Đinh Thị Bích Lân, 2007).
1.8.2.2. Phản ứng ELISA trực tiếp tìm kháng nguyên
Cố định kháng thểđặc hiệu vào các giếng của khay nhựa, rửa để loại bỏ kháng thể không dính.
Cho huyết thanh hoặc huyễn dịch bệnh phẩm (nghi có chứa kháng nguyên) đã chiết xuất thành dung dịch vào. Nếu có kháng nguyên tương ứng chúng sẽ gắn với kháng thểđặc hiệu, rửa để loại bỏ các phần thừa.
Cho kháng kháng thểđã gắn enzyme vào. Kháng kháng thể sẽ gắn với kháng thể có trong phức hợp kháng nguyên - kháng thể ở bước trên, rửa sạch để loại bỏ
các phần thừa. Sau khi cho cơ chất của enzyme vào, nếu có xuất hiện màu tức là có
kháng nguyên tương ứng với kháng thể đặc hiệu, phản ứng dương tính. Nếu không xuất hiện màu là phản ứng âm tính (Đinh Thị Bích Lân, 2007).