hương đại diện
Đánh giá đa dạng di truyền để khai thác sử dụng nguồn gen là vô cùng cần thiết góp phần hữu ích trong công tác lai tạo giống. Đánh giá mức độ đa dạng di truyền của tập đoàn mướp hương, ngoài sử dụng các chỉ thị hình thái, việc áp dụng chỉ thị phân tử DNA, cụ thể là chỉ thị RAPD được coi là phương pháp hữu hiệu nhất.
RAPD là chỉ thị nhân ngẫu nhiên các đoạn DNA trong genome trên cơ sở phương pháp PCR dùng một đoạn mồi. Các mồi này sẽ bắt cặp một cách ngẫu nhiên vào DNA khuôn ở một vị trí bất kỳ mà tại đó có trình tự bổ sung với nó. Chỉ thị RAPD
phát hiện tính đa dạng đáng tin cậy (sự mất đoạn nhiễm sắc, sự thay đổi, thêm bớt nucleotit, xen đoạn…đều làm thay đổi kích thước đoạn nhân bản).
Để phân tích tính đa hình DNA của tập đoàn mướp hương, chúng tôi đã sử dụng 100 mồi để khảo sát tính đa hình của 4 giống đại diện từ 48 giống nghiên cứu có những đặc điểm hình thái đối lập nhau như B3 và B10 (có một số đặc điểm hình thái giống nhau và quả có mùi thơm nếp) và B1 và B2 (có một số đặc điểm hình thái giống nhau nhưng đối lập với giống B3 và B10 và quả không có mùi thơm nếp). Từ những kết quả điện di của 4 giống trên với 100 mồi RAPD cho thấy có 33 mồi biểu hiện đa hình giữa 4 giống mướp hương này (Hình 3.2). Các mồi loại bỏ là các mồi hoặc không nhân lên được đoạn DNA nào hoặc chỉ có 1 đoạn, không có ý nghĩa trong việc xác định đa hình DNA.
Để kiểm chứng các mồi đa hình RAPD, chúng tôi tiếp tục sử dụng 33 mồi đa hình để phân tích thêm 4 giống đại diện khác gồm B30, ĐP và A1 cùng với 4 giống đã được sử dụng ở trên để so sánh kết quả khuếch đại của các mồi RAPD. Từ sản phẩm điện di thu được (Hình 3.3), chúng tôi chọn 11 mồi trong 33 mồi biểu hiện đa hình cho các băng DNA rõ nét sử dụng cho nghiên cứu đánh giá kiểu gen của 48 giống mướp hương.
Hình 3.2 Kết quả điện di của một số mồi RAPD biểu hiện đa hình được khảo sát từ 4 giống mướp hương (B3, B10, B1 và B2).
Ghi chú: M: 100 bp DNA ladder.
Hình 3.3 Kết quả điện di của một số mồi RAPD biểu hiện đa hình được khảo sát từ 7 giống mướp hương (B3, B10, B30, ĐP, B1, B2 và A1).
Ghi chú: M: 100 bp DNA ladder.
Mũi tên chỉ các đoạn DNA biểu hiện đa hình đại diện.