Thí nghiệm 1: Đánh giá ảnh hưởng của các loại môi trường nuôi cấy khác nhau tới khả năng phát triển của mảnh mô thể quả nấm Linh chi
Thí nghiệm được tiến hành trên 3 loại môi trường khác nhau gồm môi trường PDA (Potato dextrose agar), môi trường YEPD (Yeast extract peptone dextrose) và môi trường PDA trên tăm bông. Cách chuẩn bị như sau:
Môi trường PDA (Potato dextrose agar): Khoai tây: 200g/l, đường:
20g/l, Agar: 15g/l, hấp khử trùng 1210C trong 30 phút ở áp suất 1atm. Quả thể tươi được xịt cồn 700C trước khi cho vào box cấy. Hơ dao và kẹp vô trùng trên ngọn lửa đèn cồn đến khi nóng đỏ, để nguội. Dùng tay xé đôi thể quả, dùng dao cắt lấy mảnh mô lõi kích thước khoảng 0,5-1cm2. Cấy mảnh mô vào môi trường đã chuẩn bị. Bọc kín bằng túi nilon vô trùng. Nuôi cấy trong điều kiện không ánh sáng ở 20-300C.
Môi trường PDA trên tăm bông: Chuẩn bị môi trường PDA lỏng: Khoai tây: 200g/l, Đường: 20g/l. Chọn tăm bông loại thân gỗ, ngâm tăm bông trong môi trường 5 phút. Chuyển sang túi nilon hoặc chai thủy tinh, hấp khử trùng 1210C trong 30 phút ở áp suất 1 atm. Quả thể tươi được xịt cồn 700C trước khi cho vào box cấy. Hơ dao và kẹp trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội.
Dùng tay xé đôi thể quả, dùng dao cắt lấy mảnh mô lõi kích thước khoảng 0,5- 1cm2. Cấy mảnh mô vào môi trường đã chuẩn bị. Nuôi cấy trong điều kiện không có ánh sáng ở 20-300C [3].
Môi trường YEPD (Yeast extract peptone dextrose): Đường: 20g/l, Agar: 20g/l, Peptone: 5g/l, Cao nấm men: 3g/l, hấp khử trùng 1210C trong 30 phút ở áp suất 1 atm. Quả thể tươi được xịt cồn 700C trước khi cho vào box cấy. Hơ dao và kẹp trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội. Dùng tay xé đôi thể quả, dùng dao cắt lấy mảnh mô lõi kích thước khoảng 0,5-1cm2. Cấy mảnh mô vào môi trường đã chuẩn bị. Nuôi cấy trong điều kiện không có ánh sáng ở 20-300C.
Thí nghiệm 2: Đánh giá ảnh hưởng của nồng độ muối ăn (NaCl) tới khả năng phát triển của mốc xanh trên môi trường phân lập nấm Linh chi
Mốc xanh là loại vi sinh vật lây nhiễm phổ biến trong quá trình nuôi trồng và tạo thể quả nấm Linh chi. Để tìm phương án hạn chế sự lây nhiễm của loại nấm mốc này, môi trường YEPD được bổ sung NaCl với nồng độ: 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, hấp khử trùng 1210C trong 30 phút ở áp suất 1 atm. Mẫu nấm mốc xanh được thu nhận từ từ bịch nấm lây nhiễm được cấy lên môi trường. Nuôi cấy trong điều kiện thường, đánh giá khả năng phát triển của nấm mốc xanh sau 3-5 ngày nuôi cấy.
Thí nghiệm 3: Đánh giá ảnh hưởng của nồng độ muối ăn (NaCl) tới khả năng phát triển của sợi nấm Linh chi
Muối ăn là một chất được kỳ vọng có tác dụng ức chế một số loại vi sinh vật lây nhiễm, tuy nhiên cũng có thể có những ảnh hưởng nhất định tới nấm Linh chi. Để đánh giá ảnh hưởng của nồng độ NaCl tới sự phát triển của nấm, môi trường YEPD được bổ sung NaCl theo các nồng độ lần lượt 1%, 2%, 3%, 4%, 5%. Hấp khử trùng 1210C trong 30 phút ở áp suất 1 atm. Cấy 1 mảnh thạch có sợi nấm có kích thước khoảng 0,5-1cm2, vào môi trường, nuôi cấy trong điều kiện không ánh sáng ở 20-300C.