Sau khi phân lập người ta xác định vi khuẩn thông qua các bước:
1. Soi trực tiếp trên kính hiển vi tiêu bản nhuộm Gram hoặc Ziehl-Neelsen:
Để kiểm tra hình thể, tính chất bắt màu của vi khuẩn.
2. Khảo sát tính chất khuẩn lạc:
Để khảo sát tính chất khuẩn lạc của vi khuẩn mọc trên các môi trường nuôi cấy thích hợp.
3. Khảo sát những tính chất sinh hoá
Muốn thế người ta thực hiện giá sinh hoá bao gồm nhiều phản ứng phát hiện những enzyme của vi khuẩn hoặc các sản phẩm chuyển hoá của các enzyme.
Đối với vi khuẩn đường ruột có thể làm giá sinh hoá đơn giản. Trong những trường hợp cần thiết mới làm giá sinh hoá hoàn chỉnh.
4. Ngƣng kết với kháng huyết thanh đặc hiệu
Phản ứng kết hợp kháng nguyên kháng thể là một phản ứng rất đặc hiệu. Một loại vi khuẩn chỉ ngưng kết với kháng huyết thanh do nó kích động sự tạo thành. Trong phòng thí nghiệm, người ta có sẵn những kháng huyết thanh của những vi khuẩn cần định danh. Sau khi đã định danh một chủng vi khuẩn bằng giá sinh hoá, người ta thực hiện phản ứng ngưng kết ở trên phiến kính để kiểm tra những kháng nguyên đặc hiệu của nó.
Ví dụ: Hình thể ở kính hiển vi và tính chất sinh hoá người ta định danh được chủng vi khuẩn khảo sát là Salmonella typhi thì người ta làm phản ứng ngưng kết với huyết thanh kháng O và kháng H của vi khuẩn nói trên và phân typ vi khuẩn.
Trong một số trường hợp người ta còn hoàn chỉnh thêm việc chẩn đoán bằng thử nghiệm độc lực trên động vật thí nghiệm, định typ huyết thanh, định typ phage...
CÂU HỎI LƢỢNG GIÁ:
1. Mục đích của việc nuôi cấy vi khuẩn là gì.
2. Có những loại môi trường nuôi cấy nào. Cho ví dụ. 3. Trình bày phương pháp ria cấy Pasteur.
34
PHẢN ỨNG SINH HOÁ
Mục tiêu:
1. Nắm được mục đích khảo sát nhưng tính chất sinh hoá của vi khuẩn. 2.Trình bày được nguyên tắc của các phản ứng sinh hoá thông thường. 3. Quan sát các phản ứng sinh hoá và giải thích kết quả.
Quá trình phân lập và định danh vi khuẩn ở bệnh phẩm thường được thực hiện qua các bước:
- Khảo sát hình thái và tính chất bắt màu của vi khuẩn ở môi trường nuôi cấy và ở kính hiển vi.
- Xác định những tính chất sinh vật hoá học.
- Xác định tính chất kháng nguyên bằng ngưng kết với kháng huyết thanh mẫu. Trong đó khảo sát những tính chất sinh hoá của vi khuẩn là khảo sát sự chuyển hoá của vi khuẩn.
Mỗi loại vi khuẩn khác nhau có nhu cầu sử dụng những chất khác nhau, và khi sử dụng các chất này chúng tạo nên những sản phẩm chuyển hoá khác nhau. Thử nghiệm các tính chất sinh hoá của vi khuẩn là khảo sát sản phẩm chuyển hoá của chúng, các sản phẩm chuyển hoá này được nhận biết bằng các chất chỉ thị hoặc màu môi trường bị biến đổi do thay đổi độ pH…Để dễ dàng ghi nhớ người ta xếp phản ứng sinh hoá vào 3 nhóm lớn: