1. Khả năng lên men đƣờng:
Trong quá trình phát triển, vi khuẩn có thể lên men đường và tạo thành axit làm đổi chỉ thị màu đỏ phenol từ màu đỏ sang màu vàng. Người ta cấy vi khuẩn vào ống đường chứa pepton, cao thịt, 1% đường và chỉ thị màu.
Trường hợp vi khuẩn có enzym hydrogenlyase thì tạo thành hơi phát hiện bằng ống Durham.
HCOOH H2 + CO2
2. Phản ứng đỏ methyl (MR, Methyl Red):
Những vi khuẩn như E.coli lên men glucoza theo type lên men axit formic pha tạo thành 1 hỗn hợp nhiều axit làm cho pH của môi trường giảm đến pH ≤ 4,5. Người ta phát hiện bằng chỉ thị đỏ methyl. Chỉ thị này đổi màu đỏ lúc pH ≤ 4,5. Nuôi cấy vi khuẩn ở môi trường Clark-lubs sau 48 giờ thêm 5 giọt đỏ methyl vào. Phản ứng dương tính lúc môi trường trở thành màu đỏ.
36
3. Phản ứng Voges-Proskauer (VP):
Những vi khuẩn như Enterobacter aerogenes lên men glucose theo typ lên men butylen glycol, ở đây sản phẩm chuyển hoá ngoài những axit còn có acetoin, hợp chất này bị khử oxy để cho butylen glycol. Thuốc thử VP phát hiện sự hiện diện của acetoin. Nuôi cấy vi khuẩn ở môi trường Clark-lubs sau 48 giờ thêm 1ml thuốc thử. Để ở nhiệt độ phòng thí nghiệm trong 30 phút, không đậy nắp ống nghiệm, phản ứng dương tính làm xuất hiện màu đỏ eosin.
4. Khả năng sử dụng Citrat:
Khác với E.coli, các loài Krebsiella và Enterobacter sử dụng citrat như nguồn cacbon duy nhất. Cấy vi khuẩn bằng cách đâm vào đáy ống thạch nghiêng Citrat Simmons chứa chỉ thị màu xanh bromothymol. Sau 48 giờ, vi khuẩn sử dụng citrat để phát triển và do đó làm kiềm hoá môi trường. Phản ứng dương tính cho thấy môi trường chuyển từ màu cỏ úa sang màu xanh dương.