- Anhydric acetic
3. Định tính bằng sắc ký lớp mỏng
3.1. Chuẩn bị bản mỏng
Có thể dùng bản mỏng silicagel tráng sẵn (như bản silicagel tráng sẵn trên nền nhôm của hãng Merck) được cắt thành những miếng có kích thước 2,5 x 10 cm. Với bản mỏng tráng sẵn thì không cần sấy hoạt hóa.
3.2. Chuẩn bị bình sắc ký và dung môi
phẳng, để yên trong 15-30 phút cho bão hòa dung môi.
3.3. Chuẩn bị mẫu thử
Cho khoảng 0,5g bột dược liệu (Nhân sâm, Tam thất…) và 5ml methanol vào một ống nghiệm, đun cách thủy trong 10 phút. Lọc bằng pipet Pasteur bịt bông, cho dịch lọc vào 1 chén sứ, cô cắn.
Hòa vài giọt MeOH, dùng dung dịch này làm mẫu thử cho sắc ký lớp mỏng.
3.4. Đưa mẫu lên bản mỏng và khai triển
Dùng mao quản lấy mẫu, chấm lên bản mỏng thành từng vạch gọn (cỡ 1mm x 3mm), cách mép dưới và mép bên của bản 1-1,5 cm (phải chắc chắn rằng các vết chấm cao hơn mức dung môi trong bình sắc ký).
Chờ cho vết chấm bay hết MeOH, đưa bản mỏng vào bình sắc ký rồi đậy nắp bình.
Khi dung môi chạy còn cách mép trên của bản khoảng 0,5cm thì lấy bản mỏng ra, để ở nhiệt độ phòng hoặc sấy nhẹ cho tới khi khô dung môi.
3.5. Phát hiện
Soi đèn UV 254nm và 365nm, ghi nhận các vết trên bản mỏng (nếu có).
Phun (hoặc nhúng nhanh bản mỏng vào khay chứa thuốc thử) thuốc thử vanilin- sulfuric (VS).
Sau khi phun/ nhúng, để đứng bản mỏng trên khay cho đến khi thật khô thuốc thử rồi sấy nhẹ bản mỏng; sau đó mới tiếp tục hơ nóng bản mỏng ở 105oC (trên khay kim loại nóng trong tủ hốt) trong vài phút để hiện màu.
Quan sát và ghi nhận kết quả
3.6. Nhận định kết quả
Vẽ lại sắc ký đồ, ghi nhận số lượng vết, màu sắc và Rf cùa các vết.