CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN
1.5. PHƢƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH KHỐI LƢỢNG PHÂN TỬ PROTEIN
DỰA VÀO PHỔ KHỐI LƢỢNG
Phƣơng pháp khối phổ hay phƣơng pháp phổ khối lƣợng (Mass spectrometry – MS) là một kỹ thuật dùng để xác định tỉ lệ khối lƣợng/điện tích (m/z). Phƣơng pháp phổ khối lƣợng đƣợc sử dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau, ví dụ trong hĩa học phƣơng pháp này cĩ nhiều ứng dụng quan trọng nhƣ: xác định phân tử khối khối phổ, nhận biết các chất cùng với cơng thức cấu trúc của chúng, xác định cơng thức cấu trúc của phân tử. Phƣơng pháp này cĩ khả năng phát hiện ra các hợp chất với độ nhậy cực cao từ 10-12 đến 10-6 gam.
1.5.1. Nguy n tắc chung
Khi cho các phân tử ở trạng thái khí va chạm với một dịng electron cĩ năng lƣợng cao thì từ các phân tử sẽ bật ra 1 hay 2 electron, khi đĩ nĩ trở thành các ion mang điện tích : +1, +2 (trong đĩ ion cĩ điện tích +1 chiếm tỉ lệ lớn).
ABC + e ABC+ + 2e (1) ABC+2 + 3e (2) Ion (1) đƣợc gọi là ion gốc hay ion phân tử.
Nếu các ion phân tử tiếp tục va chạm với dịng electron cĩ năng lƣợng cao thì chúng sẽ bị phá vỡ thành nhiều mảnh ion, tạo nên các gốc hoặc các phân tử trung hịa khác nhau. Quá trình này đƣợc gọi là quá trình phân mảnh (fragmentation).
ABC+ A+ + BC ABC+ AB+ + C
A++B
Năng lƣợng của quá trình phân mảnh chỉ vào khoảng 30 – 100 eV, cao hơn năng lƣợng ion hĩa phân tử (8 – 15 eV).
Các ion cĩ khối lƣợng m và điện tích e. Tỉ số m/e đƣợc gọi là số khối z. Bằng cách nào đĩ tách các ion cĩ số khối khác nhau ra khỏi nhau và xác định đƣợc xác suất cĩ mặt của chúng. Tiến hành vẽ đồ thị biểu diễn mối quan hệ giữa xác suất cĩ mặt (hay cƣờng độ I) và số khối z, đồ thị thu đƣợc chính là phổ khối lƣợng [127]
Từ vị trí của các peak phân tử đọc đƣợc trên phổ khối lƣợng ta sẽ biết đƣợc số khối của phân tử hay cịn gọi là phân tử khối khối phổ.
1.5.2. Phƣơng pháp xác định phân t khối của protein