Định lượng Creatinin:

Tống quát:

 Trị số bình thường: 0.6-1.5 mg/dl

 Là sản phẩm thối hố của creatin cơ

 Có 2 nguồn gốc:

 Tạo thành qua các bước:

o Tại thận: arginin tác dụng với glycin tạo guanidoacetat và ornithin

o Tại gan: Guanidoacetat tác dụng với methionin ở dạng hoạt hóa S-adenosyl methionin (SAM) tạo nên creatin

o Creatin được chuyển qua máu tới cơ, tác dụng với ATP  Creatin-P: dự trữ năng lượng

o Creatin-P được khử H2O và giải phóng Phosphate tạo thành creatinin  đào thải qua thận và ra nước tiểu

 Để đánh giá mức lọc thận đặc hiệu hơn nồng độ ure 1. Nguyên tắc định lượng:

Trong dung dịch kiềm, creatinine hình thành phức hợp có màu với picrate (phương pháp Jaffe không khử protein) Creatinine + acid picric  phức hợp Creatinine-acid picric (vàng cam)

2. Nồng độ của các dung dịch được sử dụng: Dung dịch đệm A

NaOH 187.8 mmol/l

Phosphate 7.5 mmol/l

Dung dịch đệm B

Dung dịch chuẩn 2 mg/dl (176.8 μmol/l¿ 3. Gíá trị kỳ vọng:

Sử dụng huyết thanh huyết tương

Mg/dl μmol/l Sơ sinh < 1.2 < 106 Trẻ em 2 đến 12 tháng < 0.9 < 80 Lớn hơn 1 tuổi < 1.0 < 88 Người lớn Nữ 0.6 – 1.2 53 -106 Nam 0.6 – 1.4 53 -120

Nước tiểu (trong 24 giờ)

g/24h Mmol/d

Nữ 0.74 – 1.57 6.6 – 15.9

Nam 1.04 – 2.35 9.2 – 20.7

Đối với đợ thanh thải Creatinine (thể tích huyết tương được lọc sạch hoàn toàn Creatinine trong 1 đơn vị thời gian)

Ml/min

Nước tiểu được pha loãng bằng saline với tỉ lệ 1/49 5. Đợ tuyến tính:

20 mg/dl hoặc 1768 μmol/l

Trong trường hợp vượt quá 20 mg/dl creatinine trong huyết tương hoặc nước tiểu đã pha loãng theo tỉ lệ 1/49 và tiếp tục pha loãng với tỉ lệ 1/5 với dung dịch NaCl 0.9% và đem kết quả nhân với 6

Phạm vi định lượng là 0.19 đến 20 mg/dl 6. Chuyển đổi đơn vị:

Mg/dl  mmol/l. Hệ số 88.4 Mmol/l  mg/dl. Hệ số: 0.0113 7. Quy trình thử nghiệm:

- Bước sóng: 492 hoặc 500nm - Nhiệt độ 25 độ C hoặc 37 độ C

- Pha thuốc thử 1 và 2 theo tỉ lệ 1/1 và đề yên trong 30 phút trước khi dùng - Có thể bảo quản 2 đến 8 đợ C trong 28 ngày hoặc 18 đến 22 độ C trong 8 giờ

Ống chuẩn Huyết thanh Nước tiểu

Thuốc thử 1000 μl 1000 μl 1000 μl

Dung dịch chuẩn 150 μl

Dung dịch đo 150 μl 150 μl

 Trộn đều và ủ trong 1 phút ở 25 độ C hoặc 30 giây ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S1) và ống đo A(STD1); đo

lại sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S2) và ống đo A(STD2) sau đó 3 phút ở 25 đợ C và 1 phút với 37 đợ C 8. Tính tốn:

Trong máu = 2 x A(S2)−A(S1)

A(STD2)−A(STD1) (mg/dl)

Trong nước tiểu = 100 x A(S2)−A(S1)

A(STD2)−A(STD1) (mg/dl) (với đợ pha lỗng 1/49) 9. Biện luận:

 Sinh lý:

Theo giới tính:

mg/l huyết thanh μmol/l huyết thanh

Nam>50 tuổi 8.1 - 14.4 72 - 127 Theo tuổi:

mg/l huyết thanh μmol/l huyết thanh

Sơ sinh 5 – 12 44 - 106

Trẻ em(1-18 tuổi) 4 – 14 35 – 123

Người lớn 6.6 - 14.4 58 – 127

Ngồi ra cịn có sự cịn phụ tḥc vào 1 số yếu tố:mang thai,sử dụng thuốc lợi niệu,tập thể dục mạnh,….

 Bệnh lý:

Creatinin huyết tăng trong các bệnh lý suy thận:

 Trước thận: Suy tim mất bù, mất nước, xuất huyết, hẹp động mạch thận.

 Tại thận: Tổn thương cầu thận ( tăng huyết áp, đái tháo đường, viêm cầu thận, bệnh thận lupus hệ thống), tổn thương ống thận (viêm thận, bể thận cấp hay mạn, sỏi thận, đau tủy xương, tăng acid uric, nhiễm độc thận).

 Sau thận: Sỏi thận, ung thư tiền liệt tuyến, các khối u bàng quang, khối u tử cung.

Creatinin huyết giảm: suy nhược cơ thể, bệnh gan mạn tính, giảm khối lượng cơ (suy cơ, loạn dưỡng cơ bắp, tuổi già),dùng thuốc

chống động kinh,…

 Độ thanh thải Creatinin:

Ccre = U .VP

U: Số mg creatinin trong mỗi dl nước tiểu trong vịng 24 giờ;

V: Thể tích nước tiểu thải ra mỗi phút (ml);

P: Creatinin huyết thanh tính theo mg/dl. Đợ thanh thải Creatinin

Nam < 40 tuổi: 107 - 139 ml/phút hoặc 1.78 - 2.32 ml/s Nữ < 40 tuổi: 87 - 107 ml/phút hoặc 1,45 - 1,78 ml/s Trẻ sơ sinh: 40 - 65 ml/phút

 Độ thanh thải để tiên lượng mức suy thận

C (ml/s) Tình trạng

>0.83 Suy thận có thể hồi phục

0.5-0.83 Suy thận còn bù tốt

0.17-0.5 Suy thận nặng

Tổng quan:

 Trị số bình thường là dưới 40UI/L

 GOT gặp nhiều ở cơ tim  định lượng để đánh giá mức tổn thương tim

 GPT gặp nhiều ở gan  định lượng để đánh giá mức hư hại của gan

 GOT và GPT là các enzyme transaminase  giúp chuyển nhóm amin trong các q trình đồng hố dị hố protein với các phản ứng đặc trưng như sau:

1. Nguyên tắc định lượng: Phản ứng đặc trưng:

 Với GOT:

α-Ketoglutarate + L-Asparate GOT→ L-Glutamate + Oxaloacetate

 Với GPT:

α-Ketoglutarate + L-Alanin GPT→ L-Glutamate + Pyruvate Phản ứng định lượng:  Với GOT: Oxaloteacetate + NADH + H+MDH → L-Malate + NAD+  Với GPT: Pyruvate + NADH + H+LDH → L-Lactate + NAD+

NADH bị oxi hoá thành NAD. Mức độ giảm của NADH ảnh hưởng trực tiếp tương ứng với sự hình thành của oxaloacetate và cả hoạt động của GOT, GPT

Dung dịch đệm

Đệm Tris pH 7.8 (30 độ C) 80 mmol/l

L-Aspartate 200 mmol/l LDH ≥ 1.6 U/L MDH > 0.5 U/l Khởi động NADH 0.18 mmol/l α-Ketoglutarate 12 mmol/l  Với GPT: Dung dịch đệm

Đệm Tris pH 7.8 (25 độ C) 70 mmol/l

L-Alanin 410 mmol/l

LDH ≥ 1.7 U/L

Khởi động NADH 0.3 mmol/l α-Ketoglutarate 18 mmol/l 3. Gía trị kỳ vọng:  Với GOT: 37oC U/L μkat/l Nam ≥38 ≥0.63 Nữ ≥32 ≥0.53  Với GPT: 37oC U/L μkat/l Nam ≥41 ≥0.7 Nữ ≥31 ≥0.5 4. Thành phần mẫu thử

Huyết thanh, huyết tương với Heparin hoặc EDTA 5. Đợ tuyến tính:

Với giá trị cao trên thang đo nên pha loãng nhiều lần với 20μl mẫu đo với 200μl dung dịch NaCl. Trong trường hợp này nhân với

hệ số là 11

Phạm vi định lượng là 5 đến 280 U/l 6. Chuyển đổi đơn vị:

U/l  μkat/l. Hệ số 0.0167

μkat/l  U/l. Hệ số: 60 7. Quy trình thử nghiệm: - Bước sóng: 334, 340, 365 nm - Nhiệt đợ 37 độ C

 Hỗn hợp phản ứng với huyết thanh: trộn thuốc thử 1 với 5 thể tích và thuốc thử 2 với 1 thể tích  Nhiệt đợ từ 2 đến 8 độ C trong 15 ngày và 18 đến 22 độ C trong 3 ngày

- Bắt đầu với huyết thanh 1000 μl (hỗn hợp phản ứng) và 100 μl (với mẫu đo)

- Bắt đầu với thuốc thử R2 1000 μl (thuốc thử 1), 100 μl (mẫu đo), 200 μl (thuốc thử 2)

 Trộn đều và ủ trong 30 giây ở 25 độ C. Đo sự thay đổi của sự hấp thụ ánh sáng trong ít nhất 3 phút sẽ cho ra 3 khoảng δA bao gồm δA1, δA2, δA3, δA4

δA/phút =(δA2−δA1)+(δA3−δA2)+(δA4−δA3) 3

8. Tính tốn:

Hệ số với phản ứng bắt đầu bằng huyết thanh

334 nm 340 nm 365 nm F x δA/phút (Ul) 1780 1746 3235 F x δA/phút (μkat/l) 29.67 29.11 53.93 Hệ số với phản ứng bắt đầu R2 334 nm 340 nm 365 nm F x δA/phút (U/l) 2103 2063 3823 F x δA/phút (μkat/l) 35.06 34.39 63.73 9. Biện luận:

Trong bệnh nhồi máu cơ tim thì GPT tăng ít hơn, GOT tăng đến 20 lần

Chương 4: Hemoglobin và Acid nucleic

I. Định lượng billirubin toàn phần:Tổng quát: Tổng quát:

 Billirubin là sắc tố có màu vàng

 Billirubin tự do (Billirubin gián tiếp) là sản phẩm của q trình thối hố Hb (Hem)

 Sau đó Billurubin tự do kết hợp với acid glucuronic tạo Billirubin liên hợp ở gan và mất tính đợc đồng thời tan được trong nước

 Billirubin toàn phần = Billirubin tự do (85%) + Billirubin liên hợp (15%)

 Billirubin tự do khuếch tán qua thành mạch và các tổ chức do có thể đi trực tiếp qua màng bán thấm gây vàng da

 Định lượng Billirubin tồn phần nhằm chẩn đốn chức năng gan, mật,…

 Định lượng Billirubin trực tiếp nhằm xác định nguyên nhân của hiện tượng vàng da là trước, tại hay sau gan 1. Nguyên tắc:

Cần chất gia tốc như: DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine

Cho billirubin tác dụng với diazotized 2,4-dichloroaniline để tạo nên azobillirubin màu đỏ. Albumin bao lấy bilirubin sẽ giải phóng bởi chát tẩy rửa

Do đặc tính nhiều vịng thơm nên hợp chất nhạy với ánh sáng

 Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ Billirubin

Diazotized 2,4-dichloroaniline 1.6 mmol/l HCl 33 mmol/l Chất tẩy rửa Thuốc thử B: NaNO2 1.5 mmol/l Thuốc thử C: Chất ổn định

Diazotized 2,4-dichloroaniline 0.8 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Chất tẩy rửa

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2o đến +8oC. Thuốc thử A và C có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng

4. Mục đích sử dụng

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa các chất gây kích thích. Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc. Khi lỡ chạm phải rửa sạch vùng da đó với nước và can thiệp y tế khi chạm phải mắt, hít hay nuốt phải.

6. Giá trị kỳ vọng: Mg/dl μmol/lMg/dl μmol/l Mg/dl μmol/l 1 ngày tuổi <6 < 103 2 ngày tuổi < 7 < 120 3 -5 ngày tuổi < 12 < 205 Trẻ em và người lớn < 1 < 17 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu 8. Đợ tuyến tính:

Nồng đợ tuyến tính là 30 mg/dl hoặc 510 μmol/l. Trong trường hợp cao hơn cần pha loãng với nước cất ở tỉ lệ ½ và nhân kết quả

với 3

9. Chuyển đổi đơn vị:Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1 Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1

10. Quy trình thử nghiệm:

 Phương pháp đo điểm cuối hố học

- Bước sóng: 546 nm - Nhiệt đợ 25 đợ C

 Trộn thuốc thử 1 với 2 ở tỉ lệ 1/1. Trước khi dùng điều chỉnh nhiệt đợ phịng trước 15 phút và trong điều kiện tối; chuẩn bị ống

trắng thứ 3 với thuốc thử 3

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đến 8 độ C trong 21 ngày và 18 đến 22 độ C trong 7 ngày

 Thử nghiệm bình thường:

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1+2 1000 μl

Huyết thanh bệnh nhân 100 μl 100 μl

Thuốc thử 3 1000 μl

 Thử nghiệm cho trẻ em:

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1+2 1000 μl

Huyết thanh bệnh nhân 20 μl 20 μl

 Trợn đều và ủ trong ít nhất 10 phút trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống

trắng A(B)

δA(S) = A(sample) – A(B)

 Tính tốn:

Thử nghiệm bình thường Thử nghiệm cho trẻ

Mg/dl δA(S) x 12.5 δA(S) x 58

μmol/l δA(S) x 214 δA(S) x 992

 Tán huyết có thể gây ảnh hưởng đến kết quả

11. Biện luận:Trị số bình thường:Trị số bình thường:Trị số bình thường: Trị số bình thường:

 Bi toàn phần từ 0.5 – 1 mg/dl

 Bi trực tiếp không quá 30%: ≤ 0.3 mg/dl

 Bi gián tiếp không quá 70%: ≤ 0.7 mg/dl

Khi Bi vượt quá mức đến 2 – 2.5 mg/dl thì gây vàng da

 Lượng Bi tăng cao so với mức bình thường là dấu hiệu cho thấy mắc các bệnh về gan cao hơn và lượng hồng cầu bị phá huỷ cao

hơn. Đối với trẻ em, việc xác định nồng độ Billirubin sẽ giúp can thiệp kịp thời vào lượng Bi dư thừa để hạn chế khả năng tổn thương tế bào não.

Các bệnh lý gây tăng giảm lượng Bi:

 Các trường hợp gây vàng da trước gan: vàng da sinh lý ở trẻ sơ sinh, truyền nhầm nhóm máu, thiếu men G6PD, sốt rét, bệnh

 Các trường hợp gây vàng da tại gan và sau gan: viêm gan siêu vi, viêm và xơ gan do rượu, ung thư tụy tạng, bệnh Dubin-

Johnson, ung thư gan, tắc đường mật do giun,… tăng bilirubin trực tiếp là chính Mợt số lưu ý khác:

 Tập luyện thể lực quá sức trước khi xét nghiệm sẽ làm cho nồng độ bilirubin tăng

 Không ăn trong một thời gian dài (nhịn ăn), điều này thường làm tăng nồng độ bilirubin gián tiếp

 Bệnh phẩm bị tán huyết

 Để mẫu bệnh phẩm tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời hay ánh sáng nhân tạo > 1 giờ sẽ làm giảm nồng độ bilirubin của bệnh phẩm (mức độ giảm nồng đợ bilirubin tồn phần có thể lên tới 50% mỗi giờ).

 Tiếp xúc trong vịng 24 giờ trước đó với thuốc cản quang sẽ làm thay đổi kết quả xét nghiệm.

 Mẫu huyết thanh đục có thể làm ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

 Ngồi ra mợt số thuốc có thể gây tăng hay giảm Bill II. Định lượng Billirubin trực tiếp:

Tổng quát:

 Xác định căn nguyên là do tan máu hay do tạo hồng cẩu không hiệu quả

 Trong thăm dò các tắc mật (trong và ngồi gan): nồng đợ bilirubin tồn tăng > 40 mg / dL chỉ dẫn tình trạng tắc nghẽn ở mức đợ tế bào gan

 Đánh giá mức độ tăng thành phần bilirubun trực tiếp hay gián tiếp có thể gợi ý các chẩn đốn:

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 20 - 40% bilirubin toàn phần: gợi ý nhiều cho vàng da nguyên nhân tại gan hơn là nguyên nhân sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 40 - 60% bilirubin toàn phần: gặp ở cả vàng da do nguyên nhân tại gan và sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm >50% bilirubin toàn phần gợi ý nhiều cho vàng da do nguyên nhân sau gan 1. Nguyên tắc:

Cho Billurubin toàn phần tác dụng với DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine và diazotized sulfanic acid để hình thành azo màu đỏ. Bil trực tiếp (Slucuronized billirubin thuỷ phân) phản ứng trực tiếp không cần DMSO hay coffeine. Sự tăng độ hấp thụ của azo ở 546 nm bị tác động trực tiwwps bởi nồng độ bil trưc tiếp trong mẫu và đo bằng máy quang phổ

2. Nồng độ chỉ định: Thuốc thử A:

Sulfanilic acid 29 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Thuốc thử B:

3. Lưu trữ và bảo quản

4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý

6. Giá trị kỳ vọng:

Lên đến 5.1 μmol/l(0.3 mg/dl)

7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh sạch và không tán huyết hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu

8. Đợ tuyến tính:

Nồng đợ tuyến tính là 8 mg/dl hoặc 137 μmol/l. Trong trường hợp cao hơn cần pha lỗng với nước mi sinh lý (0.9%) ở tỉ lệ 1/5

Định lượng billirubin toàn phần:

Phân tích nước tiểu 10 thơng số