Định lượng billirubin toàn phần:

Tổng quát:

 Billirubin là sắc tố có màu vàng

 Billirubin tự do (Billirubin gián tiếp) là sản phẩm của q trình thối hố Hb (Hem)

 Sau đó Billurubin tự do kết hợp với acid glucuronic tạo Billirubin liên hợp ở gan và mất tính đợc đồng thời tan được trong nước

 Billirubin toàn phần = Billirubin tự do (85%) + Billirubin liên hợp (15%)

 Billirubin tự do khuếch tán qua thành mạch và các tổ chức do có thể đi trực tiếp qua màng bán thấm gây vàng da

 Định lượng Billirubin tồn phần nhằm chẩn đốn chức năng gan, mật,…

 Định lượng Billirubin trực tiếp nhằm xác định nguyên nhân của hiện tượng vàng da là trước, tại hay sau gan 1. Nguyên tắc:

Cần chất gia tốc như: DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine

Cho billirubin tác dụng với diazotized 2,4-dichloroaniline để tạo nên azobillirubin màu đỏ. Albumin bao lấy bilirubin sẽ giải phóng bởi chát tẩy rửa

Do đặc tính nhiều vịng thơm nên hợp chất nhạy với ánh sáng

 Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ Billirubin

Diazotized 2,4-dichloroaniline 1.6 mmol/l HCl 33 mmol/l Chất tẩy rửa Thuốc thử B: NaNO2 1.5 mmol/l Thuốc thử C: Chất ổn định

Diazotized 2,4-dichloroaniline 0.8 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Chất tẩy rửa

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2o đến +8oC. Thuốc thử A và C có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng

4. Mục đích sử dụng

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa các chất gây kích thích. Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc. Khi lỡ chạm phải rửa sạch vùng da đó với nước và can thiệp y tế khi chạm phải mắt, hít hay nuốt phải.

6. Giá trị kỳ vọng: Mg/dl μmol/lMg/dl μmol/l Mg/dl μmol/l 1 ngày tuổi <6 < 103 2 ngày tuổi < 7 < 120 3 -5 ngày tuổi < 12 < 205 Trẻ em và người lớn < 1 < 17 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu 8. Đợ tuyến tính:

Nồng đợ tuyến tính là 30 mg/dl hoặc 510 μmol/l. Trong trường hợp cao hơn cần pha loãng với nước cất ở tỉ lệ ½ và nhân kết quả

với 3

9. Chuyển đổi đơn vị:Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1 Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1

10. Quy trình thử nghiệm:

 Phương pháp đo điểm cuối hố học

- Bước sóng: 546 nm - Nhiệt đợ 25 đợ C

 Trộn thuốc thử 1 với 2 ở tỉ lệ 1/1. Trước khi dùng điều chỉnh nhiệt đợ phịng trước 15 phút và trong điều kiện tối; chuẩn bị ống

trắng thứ 3 với thuốc thử 3

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đến 8 độ C trong 21 ngày và 18 đến 22 độ C trong 7 ngày

 Thử nghiệm bình thường:

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1+2 1000 μl

Huyết thanh bệnh nhân 100 μl 100 μl

Thuốc thử 3 1000 μl

 Thử nghiệm cho trẻ em:

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1+2 1000 μl

Huyết thanh bệnh nhân 20 μl 20 μl

 Trợn đều và ủ trong ít nhất 10 phút trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống

trắng A(B)

δA(S) = A(sample) – A(B)

 Tính tốn:

Thử nghiệm bình thường Thử nghiệm cho trẻ

Mg/dl δA(S) x 12.5 δA(S) x 58

μmol/l δA(S) x 214 δA(S) x 992

 Tán huyết có thể gây ảnh hưởng đến kết quả

11. Biện luận:Trị số bình thường:Trị số bình thường:Trị số bình thường: Trị số bình thường:

 Bi toàn phần từ 0.5 – 1 mg/dl

 Bi trực tiếp không quá 30%: ≤ 0.3 mg/dl

 Bi gián tiếp không quá 70%: ≤ 0.7 mg/dl

Khi Bi vượt quá mức đến 2 – 2.5 mg/dl thì gây vàng da

 Lượng Bi tăng cao so với mức bình thường là dấu hiệu cho thấy mắc các bệnh về gan cao hơn và lượng hồng cầu bị phá huỷ cao

hơn. Đối với trẻ em, việc xác định nồng độ Billirubin sẽ giúp can thiệp kịp thời vào lượng Bi dư thừa để hạn chế khả năng tổn thương tế bào não.

Các bệnh lý gây tăng giảm lượng Bi:

 Các trường hợp gây vàng da trước gan: vàng da sinh lý ở trẻ sơ sinh, truyền nhầm nhóm máu, thiếu men G6PD, sốt rét, bệnh

 Các trường hợp gây vàng da tại gan và sau gan: viêm gan siêu vi, viêm và xơ gan do rượu, ung thư tụy tạng, bệnh Dubin-

Johnson, ung thư gan, tắc đường mật do giun,… tăng bilirubin trực tiếp là chính Mợt số lưu ý khác:

 Tập luyện thể lực quá sức trước khi xét nghiệm sẽ làm cho nồng độ bilirubin tăng

 Không ăn trong một thời gian dài (nhịn ăn), điều này thường làm tăng nồng độ bilirubin gián tiếp

 Bệnh phẩm bị tán huyết

 Để mẫu bệnh phẩm tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời hay ánh sáng nhân tạo > 1 giờ sẽ làm giảm nồng độ bilirubin của bệnh phẩm (mức độ giảm nồng đợ bilirubin tồn phần có thể lên tới 50% mỗi giờ).

 Tiếp xúc trong vịng 24 giờ trước đó với thuốc cản quang sẽ làm thay đổi kết quả xét nghiệm.

 Mẫu huyết thanh đục có thể làm ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

 Ngồi ra mợt số thuốc có thể gây tăng hay giảm Bill II. Định lượng Billirubin trực tiếp:

Tổng quát:

 Xác định căn nguyên là do tan máu hay do tạo hồng cẩu không hiệu quả

 Trong thăm dò các tắc mật (trong và ngồi gan): nồng đợ bilirubin tồn tăng > 40 mg / dL chỉ dẫn tình trạng tắc nghẽn ở mức đợ tế bào gan

 Đánh giá mức độ tăng thành phần bilirubun trực tiếp hay gián tiếp có thể gợi ý các chẩn đốn:

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 20 - 40% bilirubin toàn phần: gợi ý nhiều cho vàng da nguyên nhân tại gan hơn là nguyên nhân sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 40 - 60% bilirubin toàn phần: gặp ở cả vàng da do nguyên nhân tại gan và sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm >50% bilirubin toàn phần gợi ý nhiều cho vàng da do nguyên nhân sau gan 1. Nguyên tắc:

Cho Billurubin toàn phần tác dụng với DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine và diazotized sulfanic acid để hình thành azo màu đỏ. Bil trực tiếp (Slucuronized billirubin thuỷ phân) phản ứng trực tiếp không cần DMSO hay coffeine. Sự tăng độ hấp thụ của azo ở 546 nm bị tác động trực tiwwps bởi nồng độ bil trưc tiếp trong mẫu và đo bằng máy quang phổ

2. Nồng độ chỉ định: Thuốc thử A:

Sulfanilic acid 29 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Thuốc thử B:

3. Lưu trữ và bảo quản

4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý

6. Giá trị kỳ vọng:

Lên đến 5.1 μmol/l(0.3 mg/dl)

7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh sạch và không tán huyết hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu

8. Đợ tuyến tính:

Nồng đợ tuyến tính là 8 mg/dl hoặc 137 μmol/l. Trong trường hợp cao hơn cần pha lỗng với nước mi sinh lý (0.9%) ở tỉ lệ 1/5

9. Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl  μmol/l. Hệ số 17.1

μmol/l  mg/dl. Hệ số: 0.0585

10. Quy trình thử nghiệm:

 Phương pháp đo điểm cuối hố học

- Bước sóng: 546 nm - Nhiệt độ 25 độ C

Ống trắng Ống đo Thuốc thử R1 1000 μl 1000 μl

Thuốc thử R2 20 μl

Huyết thanh 100 μl 100 μl

 Trộn đều và ủ trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B) sau đúng 5

phút

δA(S) = A(sample) – A(B)

 Tính tốn:

Mg/dl δA(S) x 12.8

μmol/l δA(S) x 219

 Tán huyết có thể gây ảnh hưởng đến kết quả

Bil rất nhạy với ánh sáng nên q trình định tính cần diễn ra ngay khi lấy mẫu 11. Biện luận:

 Triệu chứng liên quan đến tăng bilirubin có thể gồm vàng da – vàng của da và mắt, mệt mỏi, ngứa da, nước tiểu sậm màu và chán ăn.

Các trường hợp tăng Bil trực tiếp:

• Giảm bài tiết Bi TT vào trong các tiểu quản mật.

• Khi gan bị tổn thương, khả năng bài tiết Bi TT giảm nặng hơn nhiều so với khả năng kết hợp • Khi khơng được bài tiết vào mật thì Bi TT sẽ quay ngược vào hệ tuần hoàn do 5 cơ chế sau:

o Vỡ các tiểu quản mật thứ phát do hoạt tử tế bào gan.

o Tắc các tiểu quản mật do tế bào gan phù nề gây chèn ép hoặc cô đặc mật.

o Tắc các tiểu quản mật trong gan do tế bào viêm.

• Bệnh lý tế bào gan: viêm gan do virus, viêm gan do thuốc (INH, Rifampicin, Halothan, Methyldopa, Chlorpromazine, Paracetamol, Salicylat..., viêm gan nhiễm đợc;

• Suy tim mất bù.

• Xơ gan, xơ gan mật tiên phát, viêm đường mật xơ hố

• Xâm nhiễm gan hoặc các tổn thương (ví dụ: bệnh lý khối u, di căn gan, bệnh Wilson, u hạt...). III. Định lượng acid uric:

Tổng quát:

 Là sản phẩm thoái hoá của nhân purin

 Việc dư thừa Acid uric có thể gây lắng đọng và dẫn đến hình thành các tinh thể urat gây bệnh Gout

 Tuy nhiên ở pH bình thường thì Acid uric ở dạng ion, khi dư thừa và pH giảm thì sẽ gây lắng đọng tinh thể urat (kết hợp với các ion kim loại như Na,…) ở các khớp tạo nốt tophi

 Định lượng Acid uric để theo dõi bệnh Gout hoặc điều trị bằng hoá xạ trị và theo dõi chức năng thận 1. Nguyên tắc:

 Phương pháp PAP

Acid uric + H2O + O2 Uricase→ Allantoin + CO2 + H2O2

 Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ acid uric

2. Nồng độ chỉ định: Dung dịch đệm:

Dung dịch đệm phosphate (pH=7.8) 100 mol/l 2,4,6 Triiodine-3-hydroxibenzone 5 mmol/l Chất tẩy màu 2 g/l Chất khởi động: Peroxidase 40 U/ml PAP 4.5 mmol/l Uricase 3 U/ml Chất ổn định

Dung dịch Acid uric chuẩn 6 mg/dl hoặc 357 μmol/l

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử còn nguyên niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2o đến +8oC. 4. Mục đích sử dụng

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hợ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa muối Natri azide (NaN3) như chất bảo quản. Không được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc

6. Giá trị kỳ vọng:

Huyết tương/huyết thanh Mg/dl μmol/l

Trẻ em Dưới 12 tháng <6.2 < 372 Trên 12 tháng < 6.1 < 362 Người lớn Nam 3.4 – 7 202 – 416 Nữ 2.4 – 5.7 142 - 339 g/24 giờ Mmol/ngày Nước tiểu 0.2 – 1 1.2 - 6 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA Nước tiểu sạch:

8. Đợ tuyến tính:

Phạm vi định lượng là 0.25 đến 25 mg/dl 9. Chuyển đổi đơn vị:

Mg/dl  mmol/l. Hệ số 59.5 Mmol/l  mg/dl. Hệ số: 0.0168 10. Quy trình thử nghiệm:

- Bước sóng: 500 - 550 nm, 546 nm - Nhiệt đợ 37 độ C

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đế 8 độ C trong 40 ngày và 18 đến 22 độ C trong 10 ngày

Ống trắng Ống đo Ống chuẩn

Thuốc thử R 1000 μl 1000 μl 1000 μl

Dung dịch chuẩn 20 μl

Huyết thanh bệnh nhân 20 μl

Nước cất 20 μl

 Trộn đều và ủ trong 5 phút ở 37 độ C. Trong 20 phút sau, đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample), đo A(standard)

 Tính tốn:

Với hệ số:

Đợ dài bước sóng c (mg/dl)

546 nm 53 x δA(S)

Với chuẩn:

Nồng độ AU = 6 x δA mẫuchuẩnδA củamẫu (mg/dl)

11. Biện luận:

Trị số bình thường của Acid uric là 3 đến 7 mg/dl

 Tăng trên 7 mg/dl có ý nghĩa lâm sàng

Các bệnh lý liên quan đến tăng AU:

Nguyên phát:

Do giảm HGPRT gây tăng PRPP kích thích tăng tổng hợp purine lên 200 lần và tăng sản phẩm thối hố của purine là AU lên: hợi chứng Lesch-Nyham (thiếu hồn tồn), hợi chứng Seegmiller (thiếu mợt phần)

Thứ phát: do ăn nhiều purine, dung huyết, hoá xạ trị, thiếu G-phosphatase (gây tan huyêt và giảm tuổi thọ hồng cầu), suy thận, tiểu đường, béo phì, cao huyết áp, nhiễm toan, cường giáp, nhược giáp, hợi chứng Down,…

 Khi có triệu chứng Gout có thể xét nnghiệm xem trong dịch khớp có tinh thể Acid uric

Các yếu tố ảnh hưởng đến trị số acid uric:

Sử dụng các loại thuốc nhất là với bệnh tim Sử dụng rượu bia

Do ngợ đợc chì hay thuốc trừ sâu Ăn kiêng quá mức

Chương 5: Glucid

I. Định lượng Glucose: 1. Tổng quát:

Nguồn gốc:

 Ngoại sinh: từ thức ăn

 Nợi sinh: qua q trình phân giải glycogen ở gan và q trình tân tạo glucose nhờ thối hố lipid và protid Là đơn vị cấu tạo cơ bản của carbohydrat, là monosaccảide

Là đơn vị cung cấp năng lượng quan trọng cho cơ thể, có thể cung cấp từ 2 đến 33 ATP tuỳ vào nguồn gốc glucose và phân giải trong điều kiện hiếu khí hay kị khí

Qúa trình điều hồ nhờ vào nhiều loại hormone bao gồm:

 Tăng đường huyết:

Adrenalin và Glucagon: Khi đường huyết giảm thì kích thích tế bào α ở tuỵ tiết ra glucagon và tác đợng lên gan kích thích gan

Glucocorticoid: tạo ra ở vỏ thượng thận, tăng tân tạo glucose, tăng hấp thụ glucose ruột, ức chế tiêu dùng glucose các mô, tăng

phân ly glycogen  tăng đường huyết

GH: ở thuỳ trước tuyến n, giảm tính thấm glucose vào mơ, giảm tổng hợp glycogen, tăng phân ly glycogen  tăng đường huyết ACTH: ở thuỳ trước tuyến yên, kích thích vỏ thượng thận sinh hormon steroid trong đó có glucocorticoid gây tăng đường huyết

 Giảm đường huyết:

Insullin: do tế bào β đảo Langerhans tuyến tuỵ tiết ra, tăng tính thấm màng tế bào đối với glucose, tăng sự sự dụng glucose ở các

mô  giảm đường huyết

 Vì insullin là hormone duy nhất giúp làm giảm nồng đợ glucose nên nó rất quan trọng trong việc điều hồ đường huyết và là cơ

sở phân loại đái tháo đường 2. Nguyên tắc định lượng:

Glucose được oxi hoá nhờ glucose oxidase trong điều kiện có oxi thành gluconolactone. Phản ứng tạo hydrogen peroxide và được ly giải với phenol và 4-aminophenazone thành quinoneimine màu đỏ tím. Đợ đậm nhạt của màu sẽ bị ảnh hưởng trực tiếp bởi lượng glucose ban đầu

Glucose + O2 + H2O GOD→ Gluconolactone + H2O2

2H2O2 + 4-aminophenazone + Phenol POD→ 4-(p-Benzo-chinonemonoimino)-phenazone +4H2O

3. Nồng độ của các dung dịch được sử dụng:

Dung dịch đệm phosphate (pH=7.5) 0.1 mol/l

4-aminophenazne 0.3 mmol/l

Phenol 1 mmol/l

Glucose oxidase > 20.0 KU/L

Peroxidase > 1.5 KU/l

Dung dịch chuẩn 100 mg/dl

 Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2o đến +8oC

Phân tích nước tiểu 10 thơng số