L ỜI CAM ĐOAN
1.2.1.1. Tạo nguồn vật liệu ban đầu
Trong giai đoạn tạo nguồn vật liệu ban đầu thì đầu tiên rong cần được thuần
hóa trong điều kiện in vitro. Rong ngoài tự nhiên đã quen với việc phát triển trong
điều kiện có nhiệt độ và CĐAScao so với điều kiện nuôi cấy in vitro. Do vậy, trước khi đưa vào môi trường in vitrocần có bước đệm giúp rong giốnglàm quen với điều kiện bên trong phòng thí nghiệm bằng cách nuôi trong các bể kính với nhiệt độ và CĐAS giảm dần đến khi đạt được điều kiện in vitro. Rong ngoài tự nhiên bị bám nhiều rong tảo vàvi sinh vật (VSV)phụ sinh, trong khi đó, mẫu đưa vào nhân giống phải đảm bảo sạch bệnh và không có phụ sinh cũng như VSV bám. Vì thế, môi trường dinh dưỡng thuần hóa rong vừa phải đảm bảo cho rong sinh trưởng tốt và vừa hạn chế sự phát triển của VSV có hại trong điều kiện in vitro. Vì vậy, Ge2O thường được sử dụng đểhạn chế phụ sinh và VSV phát triển. Tuy nhiên, đây là hóa chất đắt tiền và có hại cho rong giống [43]. Vì thế, việc tìm ra loại môi trường phù hợp với giai đoạn thuần hóa rong làm nguyên liệu nhân giống là rất cần thiết.
Sau khi rong thích nghi với điều kiện in vitrothì bước tiếp theo là khử trùng mẫu cấy. Khử trùng mẫu cấy sau giai đoạn thuần hóa rong là bước quan trọng quyết định cả quá trình nhân giống. Hiệu quả của nhân giống in vitro phụ thuộc vào giai đoạn khử trùng mẫu cấy. Khử trùng mẫu cấy ở rong biển gặp khó khăn hơn so với thực vật bậc cao [44] và tỉ lệ mẫu vô trùng đạt được thấp [45]. Do cấu trúc tản rong
biển có lớp biểu bì bên ngoài mỏng [46] và chỉ được bảo vệ bởi một lớp tế bào. Khi
rong được khử trùng, lớp này bị mấtđi, các nguyên tố kim loại dễ dàng xâm nhập và
nhữngtác nhân vật lí khác làm hư hại mô rong. Do đó,mô rong trở nên nhạy cảm sau khi khử trùng. Vì vậy, phương pháp khử trùng phải vừa có thể loại bỏ các tác nhân như: Vi khuẩn, nấm và các VSV khác mà vẫn bảo vệ được các tế bào của mô cấy. Khả năng tiêu diệt nấm, khuẩn và VSV khác của các chất khử trùng phụ thuộc vào nồng độ, thời gian xử lý và mức độ xâm nhập của chúng vào các ngõ ngách trên bề mặt của mô cấy. Vì vậy, tùy thuộc vào loài rong mà lựa chọn chất khử trùng cũng như nồng độ sử dụng phù hợp.