L ỜI CAM ĐOAN
2.3.3.4. Cảm ứng mô sẹo và nhân nhanh mô sẹo
Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố nuôi cấy đến sự cảm ứng mô sẹo
Sử dụng mẫuđã được khử trùng bằng loại, nồng độ và thời gian khử trùng tối ưu ởthí nghiệm trên để làm nguyên liệu cho các thí nghiệm cảm ứng mô sẹo. Cắt nhỏ
mẫu vô trùng với kích thước 4 –5 mm rồi đặt vào đĩa petri có chứa 40 mL môi trường.
Đĩa petri mang mẫucấy được bọc kín bằng Parafilm nhằm tránh không khí bên ngoài
lọt vào và đặt dưới điều kiện in vitro. Các yếu tố nuôi cấy được khảo sát là: (1) các loại môi trường dinh dưỡng: PES; PES ½; ½ PES (Phụ lục 1.4.2) [77]; MPI; MPI ½; ½ MPI (Phụ lục 1.4.3) [78]; MS; MS ½ và ½ MS (Phụ lục 1.4.1) [79] và đối chứng (không bổ sung dinh dưỡng); (2) CĐHSTTV: Đơn lẻ hoặc kết hợp NAA (0,1; 1,0
mg.L-1) hoặc BAP (0,1; 1,0 mg.L-1) và đối chứng (không bổ sung NAA và BAP); (3)
hàm lượng agar (Algae culture agar, Himedia, Ấn Độ): 5; 10; 15; 20 g.L-1; (4) CĐAS:
0; 5; 15; 35; 55 µmol photons.m-2.s-1dưới ánh sáng trắng đèn huỳnh quang với số lượng
đèn khác nhau để tìm ra điều kiện cảm ứng mô sẹo. Môi trường nuôi cấy là các môi trường dinh dưỡng được pha bằng nước biển có độ mặn 30 –35‰ đã được lọc qua lưới có kích thước lỗ 22 µm và bổ sung 15 g.L-1 agar (Algae culture agar, Himedia, Ấn Độ). Tùy vào mục đích từng thí nghiệm mà có sự điều chỉnh hàm lượng agar, môi trường dinh dưỡng và các CĐHSTTV phù hợp.Môi trường được hấp khử trùng bằng
autoclave ở 121oC với thời gian 20 phút. Các thí nghiệm được tiến hành độc lập, mỗi
thí nghiệm bố trí với mỗi nghiệm thức gồm 3 đĩa petri, mỗi đĩa petri chứa 10 mẫu.
Ảnh hưởng của các loại môi trường dinh dưỡng, NAA và BAP đối với khả năng nhân nhanh mô sẹo
Cụm mô sẹo 8 tuần tuổi thu từ thí nghiệm trên được cắt thành những mẫu có kích thước khoảng (5 x 5 mm) và khối lượng 30 mg được đặt vào đĩa petri có chứa 40 mL môi trường. Đĩa petri mang mẫucấy được bọc kín bằng Parafilm nhằm tránh không khí bên ngoài lọt vào và đặt dưới điều kiện in vitro. Các yếu tố nuôi cấy được khảo sát là: (1) các loại môi trường dinh dưỡng: PES; PES ½; ½ PES (Phụ lục 1.4.2) [77]; MPI; MPI ½; ½ MPI (Phụ lục 1.4.3) [78]; MS; MS ½ và ½ MS (Phụ lục 1.4.1)
[79] và đối chứng (không bổ sung dinh dưỡng); (2) CĐHSTTV: Đơn lẻhoặc kết hợp
NAA (1; 2; 3 mg.L-1) hoặc BAP (1; 2; 3 mg.L-1) và đối chứng (không bổ sung NAA
hoặc BAP) nhằm xác định được môi trường phù hợp trong giai đoạn nhân nhanh mô sẹo rong Bắp sú. Môi trường nuôi cấy là các môi trường dinh dưỡng được pha bằng nước biển có độ mặn 30 – 35‰ đã được lọc qua lưới có kích thước lỗ 22 µm và bổ
sung 15 g.L-1 agar (Algae culture agar, Himedia, Ấn Độ). Tùy vào mục đích từng thí
trường được hấp khử trùng bằng autoclave ở 121oC với thời gian 20 phút. Các thí nghiệmđượctiến hành độc lập, mỗi thí nghiệm được bố trí với mỗi nghiệm thức gồm 3 đĩa petri, mỗi đĩa petri chứa 10 mẫu.