- Ống BGBL dương tính : môi trường đục và ống durham nổi hoặc có bọt khí trong ống .
- Ống BGBL âm tính : không có hiện tượng gì xảy ra
c) Tính toán
- Tỷ lệ xác nhận R
Số khuẩn lạc sinh hơi trong BGBL R = --- Số khuẩn lạc đã cấy - Số lượng Coliforms Trong đó: + N: Tổng số khuẩn lạc đếm được + n : Số đĩa
+ V: Thể tích mẫu cấy vào mỗi đĩa + f : Độ pha loãng (f = 1)
+ R: Tỷ lệ xác nhận.
N
C ( CFU/ml) = --- . R n.V.f
4.4.2. Định lượng Escherichia coli (E.coli) trong sữa tươi tiệt trùng bằng phươngpháp lên men nhiều ống MPN ( Most Probable Number) pháp lên men nhiều ống MPN ( Most Probable Number)
Đây là phương pháp dựa trên nguyên tắc xác suất thống kê sự phân bố của vi sinh vật trong các độ pha loãng khác nhau của mẫu. Mẫu được cho vào các ống nghiệm có chứa môi trường thích hợp cho sự tăng trưởng của từng loại vi sinh vật cần định lượng một thể tích chính xác dung dịch mẫu đã được pha loãng. Ủ ở nhiệt độ, thời gian thích hợp. Ghi nhận lại số ống cho kết quả dương tính và âm tính của từng độ pha loãng. Tra kết quả nhận được bằng bảng Mac Crady để tính mật độ vi sinh vật. Phương pháp MPN được dùng để định lượng E.coli khi chúng phát triển được trong môi trường lỏng và tạo ra các tín hiệu dễ dàng nhận dạng như: sinh hơi, làm đục môi trường chọn lọc, làm thay đổi pH của môi trường...
4.4.2.1. Các hệ thống thường dùng trong phương pháp lên men nhiều ống MPN
- Hệ thống 1: Mỗi dãy 2 ống
Dãy 1 3 ống 10ml mẫu nước
Dãy 2 3 ống 1ml mẫu nước
Dãy 3 3 ống 0,1ml mẫu nước - Hệ thống 2: Mỗi dãy 5 ống
Dãy 1 5 ống 10ml mẫu nước
Dãy 2 5 ống 1ml mẫu nước
Dãy 3 5 ống 0,1ml mẫu nước
4.4.2.2. Nguyên tắc
Số lượng E.coli có thể xác định được bằng phương pháp MPN. Phương pháp này dựa vào nguyên tắc mẫu được pha loãng thành một dãy thập phân liên tiếp (hai nồng độ kế tiếp chênh nhau 10 lần) và đưa vào các ống nghiệm có chứa môi trường thích hợp có chứa ống durnham, ủ và đọc số ống có kết quả dương tính. Số ống nghiệm cho phản ứng dương tính của các nồng độ pha loãng được tra theo bảng MPN để xác định số lượng E.Coli /100ml.
4.4.2.3. Quy trình phân tícha) Cấy mẫu a) Cấy mẫu
GVHD:Huỳnh Văn Thành
Xếp 6 ống nghiệm môi trường Lastose broth có chứa ống durnham lên giá ống nghiệm làm 2 dãy (hệ thống 1, mỗi dãy 3 ống nghiệm):
- Lấy 10ml mẫu cho vào 3 ống dãy 1 - Lấy 1ml mẫu cho vào 3 ống dãy 2
Lắc nhẹ để mẫu trộn đều vào môi trường, tránh tạo bọt khí, ủ ở 440C trong 24h.
b) Tăng sinh
Chọn các ống nghiệm sinh khí (+) cấy chuyển sang môi trường canh EC có chứa ống durnham (cấy chuyển theo 3 dãy tương ứng), ủ ở 440C trong 24h.
c) Phân lập
Chọn các ống nghiệm có sinh khí (+) cấy chuyển sang môi trường EMB, ủ ở 370C trong 24h (cấy chuyển theo 3 dãy tương ứng).