- Tế bào lỏch cỏ mỳ dũng GS
3.2.2.2.Ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng gõy bệnh của virus trờn ấu trựng cỏ mỳ
trựng cỏ mỳ
Theo tỏc giả Chi và cộng sự, 1999, khả năng nhiễm bệnh hoại tử thần kinh của cỏ mỳ phụ thuộc rất nhiều vào yếu tố nhiệt độ, vỡ vậy đồng thời với việc đỏnh giỏ ảnh hưởng của nhiệt độ đến khả năng gõy nhiễm của NNV trờn tế bào mẫn cảm, chỳng tụi thực hiện thớ nghiệm gõy nhiễm NNV vào cỏ mỳ ở 2 điều kiện nhiệt độ là: 280C (cả ngày) và 280 (ban ngày), 240C (ban đờm). Mức độ gõy nhiễm được xỏc định bằng phản ứng PCR phỏt hiện vựng gen đặc hiệu T2 của NNV nhằm chứng minh sự cú mặt của virus trong cỏ thớ nghiệm.
Bảng 3.6. Khả năng gõy bệnh của VR trờn cỏ mỳ ở 28oC cả ngày Chủng Xuất hiện gen T2 của NNV theo thời gian gõy nhiễm (h)
Tỷ lệ chết (%) theo thời gian gõy
nhiễm (h) 10 20 30 50 80 270 24 50 80 QN4 NNV + + + + 80 100 ĐC - - - 0 0 5 KH4 NNV + + + + 68 100 ĐC - - - 0 0 5 lvi
Kết quả trong bảng 3.6 cho thấy: lụ ấu trựng cỏ gõy nhiễm NNV chủng QN4 được nuụi nhiệt độ duy trỡ 280C cả ngày cú tỷ lệ chết tớch lũy là 80% sau 1 ngày, tiếp tục theo dừi đến 50 giờ, tỷ lệ này lờn tới 100%. Trong khi đú, cựng ở điều kiện này, tỷ lệ ấu trựng chết ở lụ đối chứng là 5% ở 80 giờ theo dừi.
Qua thớ nghiệm cũng cho thấy lụ ấu trựng cỏ gõy nhiễm NNV chủng KH4 cú tỷ lệ chết tớch lũy là 68% sau 1 ngày, khi theo dừi đến 50 giờ, tỷ lệ này lờn tới 100%. Trong cựng điều kiện nhiệt độ ở lụ đối chứng tỷ lệ chết là 5% sau 50 giờ theo dừi.
Chỳng tụi tiếp tục bố trớ thớ nghiệm ở 28oC vào ban ngày và 24oC vào ban đờm để xỏc định mức độ gõy bệnh trờn ấu trựng cỏ mỳ. Kết quả được thể hiện ở bảng 3.7.
Bảng 3.7. Khả năng gõy bệnh của VR trờn cỏ mỳ ở 28oC ngày và 24oCđờm
Chủng Xuất hiện gen T2 của NNV theo thời gian gõy nhiễm (h) Tỷ lệ chết (%) theo thời gian gõy nhiễm (h)
10 20 30 50 80 270 24 50 80
QN4 NNV - + + + + 10 60 100
ĐC - - - 0 0 10
KH4 NNV - + + + + 30 60 100
ĐC - - - 0 0 5
Ghi chỳ: +: cú gen T2 -: khụng cú genT2
Kết quả thớ nghiệm ở điều kiện nước 280C vào ban ngày và 240C vào ban đờm, tỷ lệ chết tớch lũy của ấu trựng sau gõy nhiễm NNV chủng QN4 là 10% sau 1 ngày theo dừi và tăng lờn 60% sau 50 giờ, đến 80 giờ thỡ tỷ lệ này lờn tới 100%.
Với chủng KH4 tỷ lệ chết tớch lũy của ấu trựng sau gõy nhiễm NNV là 30% sau 1 ngày tuy nhiờn sau 50 giờ tỷ lệ chết tăng lờn 60% và gõy chết hoàn toàn sau 80 giờ trong khi ở lụ đối chứng sau 80 giờ theo dừi thớ nghiệm tỷ lệ chết là 5%
Như vậy so với điều kiện nước nuụi ở 280C cả ngày, ấu trựng cỏ ở lụ nhiệt độ biến đổi chết chậm hơn, tuy nhiờn lụ đối chứng cú tỷ lệ chết cao hơn so với lụ ổn nhiệt. Kiểm tra sự cú mặt của NNV trong ấu trựng cỏ gõy nhiễm bằng phản ứng PCR cho thấy: từ 10 giờ virus đó xõm nhập vào cỏ và tồn tại trong suốt thời gian thớ nghiệm (đến 270 giờ) (hỡnh 3). Lụ đối chứng õm, mặc dự cỏ chết nhưng khụng phỏt hiện thấy gen T2.
Hỡnh 3.10. Hỡnh ảnh điện di sản phẩm PCR kiểm tra ấu trựng cỏ thớ nghiệm M: Thang DNA chuẩn; cỏc giếng 1-3, 4-6 là sản phẩm PCR kiểm tra ấu trựngs sau gõy nhiễm 10, 20, 30, 50, 80, 270 giờ; cỏc giếng 7,8,9 là sản phẩm PCR mẫu đối chứng õm ở 50, 80, 270 giờ
Theo Mori và cs. (1991), Fukuda và cs. (1996), Le Breton và cs. (1997), bệnh hoại tử thần kinh (VNN) thường xảy ra trờn cỏ mỳ vào mựa hố, khi nhiệt độ nước khoảng 25- 280C, tuy nhiờn, khi nhiệt độ xuống thấp hơn 230C thỡ tỷ lệ cỏ chết do nhiễm bệnh giảm đi đỏng kể. Tại Đài Loan, NNV thường gõy bệnh vào khoảng thời gian từ thỏng 4 đến thỏng 9, trong đú, thời gian gõy chết nhiều nhất là từ thỏng 6-8 khi nhiệt độ nước dao động từ 30- 320C. Từ thỏng 10 trở đi, tỷ lệ cỏ chết giảm hẳn nhưng kiểm tra bằng phản ứng PCR vẫn phỏt hiện thấy gen T2, điều này chứng tỏ, khi nhiệt độ giảm, mặc dự cỏ vẫn mang trựng nhưng khụng gõy hiện tượng hoại tử tổ chức vỡ vậy khụng gõy chết cỏ nhiễm bệnh. Như vậy, nhiệt độ là yếu tố cú ảnh hưởng lớn
đến tỷ lệ chết của cỏc nhiễm NNV, kết quả thớ nghiệm ở bảng 6 là cơ sở để giải thớch hiện tượng tỷ lệ chết ở cỏ mỳ thường tập trung chủ yếu vào thỏng 4- 6 ở Việt Nam.