phòng thí nghiệm
Quá trình thí nghiệm xác định nồng độ của nước ép lá hẹ diệt nấm Saprolegnia được thể hiện ở sơ đồ sau:
Thí nghiệm 1: Thí nghiệm sàng lọc các nồng độ chế phẩm
Thí nghiệm được bố trí ở các đĩa peptri đã được khử trùng.
Bước 1: Dung dịch nước ép lá hẹ được pha loãng bằng nước cất khử trùng ở
các nồng độ khác nhau, nồng độ sau giảm dần (với nồng độ cao nhất là 100%) và mỗi nồng độ lặp lại 3 lần. Nghiệm thức đối chứng không bổ sung nước ép lá hẹ vào.
Bước 2: Nấm thuần Saprolegnia được nuôi cấy ở môi trường tăng sinh GY
broth. Sau 24h dùng kéo, panh cắt nhỏ những sợi nấm, rửa sạch trong nước cất đã khử trùng 3 lần. Những sợi nấm này cho vào dung dịch nước hẹ ở những
TN1
Xác định được nồng độ thấp nhất của nước ép lá hẹ có khả năng ức chế sự phát triển của nấm Saprolegnia.
Kết quả ở TN1 được pha loãng và xác định được nồng độ ức chế tối thiểu của nước ép lá hẹ lên sự phát triển của nấm Saprolegnia.
TN2
TN3
Xác định nồng độ diệt tối thiểu: Những nồng độ nước ép lá hẹ ở TN2 được để trong tủ ấm. Sau 7 ngày nồng độ thấp nhất mà nấm không thể phát triển được.
nồng độ khác nhau đã được pha ở trên tương ứng với thời gian thử nghiệm (10phút, 30 phút, 1h, 2h, 24h, 48h).
Bước 3: Sợi nấm đã ngâm trong dung dịch nước hẹ được lấy ra và nuôi cấy trên môi trường GY agar. Để trong 48h trong tủ ấm ở nhiệt độ 200C
Bước 4: Đọc kết quả:
Nồng độ thấp nhất của nước ép lá hẹ có khả năng ức chế sự phát triển của nấm được dùng để làm thí nghiệm thứ 2.
Thí nghiệm 2: Xác định các nồng độ ức chế
Từ kết quả thí nghiệm 1, xác định được nồng độ thấp nhất ức chế khả năng phát triển của nấm. Nồng độ này được pha loãng ở những nồng độ khác nhau dùng để tiến hành thí nghiệm 2. TN2 được bố trí như TN1. Các nghiệm thức đối chứng không bổ sung nước ép lá hẹ. Sau 48h đọc kết quả.
Thí nghiệm 3: Xác định nồng độ diệt nấm Saprolegnia tối thiểu
Những nồng độ ức chế được sự phát triển của nấm ở TN2 sẽ được để trong tủ ấm. Sau 7 ngày nồng độ thấp nhất mà nấm không thể phát triển được đó là nồng độ diệt tối thiểu.