* Ảnh hưởng của các nồng độ muối NaCl
Bảng 3.7. Kết quả phân tích anova của các nồng độ NaCl ảnh hưởng đến sự phát triển của khuẩn lạc nấm Saprolegnia
Nồng độ
NaCl (%) Đường kính khuẩn lạc (cm) LSD0.05
4 0 ± 0 a 3 0 ± 0 a 2 3.1 ± 0.256 b 1.5 5.2 ± 0.529 c 1 7.7 ± 0.436 d 0.5 9 ± 0.05e
Hình 3.21. Tốc độ sinh trưởng của nấm sau 3 ngày nuôi cấy trên môi trường GY agar chứa các nồng độ NaCl khác nhau.
Qua kết quả phân tích Anova và bảng so sánh LSD0,05 cho thấy có sự sai khác có ý nghĩa thống kê với P < 0,05 về sự phát triển của khuẩn lạc nấm ở các nồng độ muối NaCl khác nhau. Khuẩn lạc nấm phát triển tốt nhất trên môi trường GY agar cũng như GY agar chứa 0,5% NaCl, càng tăng nồng độ NaCl thì khuẩn lạc càng kém phát triển. Ở NaCl > 3% thì khuẩn lạc nấm hoàn toàn không phát triển.
* Ảnh hưởng của các nồng độ muối KCl
Bảng 3.8. Kết quả phân tích anova của yếu tố muối KCl ảnh hưởng tới sự phát triển của khuẩn lạc nấm Saprolegnia
Nồng độ KCl (%) Đường kính khuẩn lạc nấm (cm) LSD0.05 4.5 0 ± 0 f 0.284 4 2.1 ± 0.1 e 3 5.3 ± 0.05 d 2 6.1 ± 0.1 c 1.5 7.2 ± 0.1 b 1 8.9 ± 0.1a 0.5 8.9 ± 0.1a
Hình 3.22. Tốc độ sinh truởng của khuẩn lạc nấm sau 3 ngày nuôi cấy trên môi trường GY agar chứa các nồng độ muối KCl khác nhau.
Qua kết quả phân tích Anova và bảng so sánh LSD0,05 cho thấy ở nồng độ muối KCl khác nhau thì có sự khác nhau về sự phát triển của khuẩn lạc với mức ý nghĩa thống kê P < 0,05. Khuẩn lạc nấm phát triển tốt trên môi trường GY agar có bổ sung thêm 0,5%; 1% KCl, phát triển kém trên môi trường GY agar có bổ sung thêm 1,5% - 4% KCl và không phát triển khi bổ sung thêm 4,5%KCl.
Từ những kết quả đã phân lập trên chúng tôi kết luận rằng tác nhân gây bệnh là giống nấm saprolegnia.
Theo Lê Văn Khoa (2006). Đây là một loài nấm gây bệnh phổ biến trong môi trường nước ngọt, gây bệnh nấm thuỷ mi ở cá nước ngọt, bệnh rất dễ lây lan, khó phát hiện gây thiệt hại lớn cho người nuôi [6].
Rechenbach - Klinke (1966) nấm bậc thấp thường hay gây ra các bệnh trên cá nước ngọt. Tuy nhiên chỉ là những cá đã bị suy nhược hoặc tổn thương mới mắc bệnh vì trên da cá khỏe mạnh thì các bào tử không thể nảy mầm được. Trong số các tác nhân gây bệnh thì Saprolegnia và Achlya là phổ biến nhất [35].
3.4. KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM NƯỚC ÉP LÁ HẸ (Allium tuberosum) DIỆT NẤM SAPROLEGNIA TRÊN CÁ CHÉP
Từ kết quả cảm nhiễm nấm chúng tôi tiến hành thí nghiệm diệt nấm bằng nước ép lá hẹ kết quả được thể hiện ở bảng sau:
Bảng 3.10. Tỷ lệ sống của cá chép sau khi điều trị bằng nước ép lá hẹ
Nồng độ Tỷ lệ sống của cá chép thí nghiệm Bể 1 (1,8 x 105) Bể 2 (1,8 x 104) Bể 3 (1,8 x 103) Bể đối chứng 14. 000ppm 90% 100% 100% 10%
Bể 1 sau 1 ngày cảm nhiễm, bể 2 và bể 3 sau 3 ngày cảm nhiễm thì chúng tôi tiến hành ngâm nước ép lá hẹ ở nồng độ 14.000ppm trong 30 phút. Kết quả của 3 bể như sau:
- Bể 1: Sau 2 ngày theo dõi thấy có 1 con bị chết, do cá bị nhiễm nặng quá không thể điều trị được, 9 con còn lại thấy không còn dấu hiệu của nấm nữa, cá bơi lội và ăn bình thường.
- Bể 2 và 3: Sau 2 ngày điều trị thấy toàn bộ cá đều không có dấu hiệu của bệnh, cá bơi lội và ăn bình thường.
- Bể đối chứng: Cá bị nhiễm nấm nhưng không điều trị bằng nước ép lá hẹ. Sau 2 ngày toàn bộ cá bị chết.
Sau 7 ngày theo dõi không có hiện tượng cá có bệnh trở lại và không có con nào chết.Chúng tôi tiến hành lấy vây, vảy cấy trên môi trường GY agar nhưng hoàn toàn không có dấu hiệu của nấm.
Như vậy chứng tỏ nước ép lá hẹ có tác dụng điều trị bệnh do nấm
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
Kết luận
1. Nước ép lá hẹ có khả năng kháng nấm Saprolegnia. sp gây bệnh nấm thuỷ mi trên cá chép.
2. Nồng độ nước ép lá hẹ tối thiểu ức chế nấm Saprolegnia. sp là 12.000ppm. 3. Nồng độ nước ép lá hẹ tối thiểu diệt nấm Saprolegnia. sp là 14.000ppm. 4. Trên đối tượng cá chép nhiễm nấm Saprolegnia sp sử dụng nước ép lá hẹ thì nấm bị tiêu diệt và không tái nhiễm trở lại sau thời gian 7 ngày.
5. Kết quả diệt nấm Saprolegnia sp của nước ép lá hẹ ở cá chép cho tỷ lệ sống từ 90% - 100% so với cá chép không tắm qua nước ép lá hẹ là 10%.
Kiến nghị
1. Nên sử dụng nước ép lá hẹ trong việc điều trị bệnh do nấm Saprolegnia.sp gây ra trên cá chép.
2. Cần có những nghiên cứu tìm ra phương thức chiết xuất lá hẹ để chế phẩm có khả năng diệt được nấm Saprolegnia sp ở nồng độ thấp.
3. Cần tiếp tục thử nghiệm nước ép lá hẹ để điều trị bệnh nấm thuỷ mi trên cá chép cũng như các đối tượng khác.
TÀI LIỆU THAM KHẢO I. Tài liệu tham khảo tiếng việt
1. Tạ Thị Bình (2006), Bài giảng kỹ thuật nuôi cá nước ngọt, Khoa Nông Lâm Ngư - Đại Học Vinh.
2. Lê văn Dân (2001), Bài giảng kỹ thuật sản xuất cá nước ngọt, Trường Đại học Nông Lâm Huế.
3. Dự án phát triển và trình diễn nuôi hải sản khu vực (RAS/ 90/ 002) Bangkok, Thailan (1991), Hội chứng dịch bệnh lở loét ở cá, NXB Nông Nghiệp.
4. Trần Vĩ Hích (2007), Bài giảng một số đặc điểm của nấm gây bệnh động vật
thuỷ sản, Trường Đại học Nha Trang.
5. Đỗ Thị Hoà, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng, Nguyễn Thị Muội (2004),
Bệnh của động vật thuỷ sản, NXB Nông Nghiêp.
6. Lê Văn Khoa (2006),”Bệnh nấm trên cá nước ngọt”, Báo cáo tóm tắt Hội
thảo về quản lý sức khoẻ động vật thuỷ sản Miền Bắc, Viện nghiên cứu
NTTS I.
7. Hà Ký và ctv (1995), Nghiên cứu biện pháp phòng trị bệnh tôm cá, Báo cáo khoa học đề tài cấp nhà nước, mã số KN – 40 – 12, năm 1991 – 1995. Bộ Thuỷ sản, NXB NN, 1996.
8. Đỗ Tất Lợi (1986), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội.
9. Đỗ Tất Lợi (2003), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Y học năm 2003, 1274 trang.
10. Nguyễn Ngọc phước, Phạm Thị Phương Lan, Nguyễn Quang Linh, Kishio Hatai (2007), Nghiên cứu khả năng kháng nấm của dịch chiết lá trầu (Piper
11. Bùi Quang Tề (2000), “Kết quả thí nghiệm thuốc phòng bệnh cho cá trắm cỏ nuôi lồng và nuôi ao”, Tuyển tập báo cáo khoa học năm 2000- NXBNN. 12. Bùi Quang Tề, Vũ Thị Tám (2000), Những bệnh thường gặp của tôm cá
nuôi ở đồng bằng Sông Cửu Long và biện pháp phòng trị.
13. Bùi Quang Tề (2002), Bệnh của cá trắm cỏ và biện pháp phòng trị, NXBNN, Hà Nội.
14.Nguyễn Thị Vân Thái, Nguyễn Minh Phúc, Ngô Thị Kim, Nguyễn Kim độ, Lưu Thị Dung (2003), “Bàn về tiềm năng phòng và chữa trị bệnh nhiễm khuẩn bằng kháng sinh thảo mộc trong NTTS”, Tuyển tập báo cáo khoa học
về NTTS tại Hội Nghị khoa học Toàn quốc lần thứ 2 ( 24 – 25/11/2003),
NXBNN.
15. Nguyễn Thị Vân Thái (2004), Nghiên cứu xây dựng bài thuốc Y học cổ
truyền ứng dụng trong phòng và chữa bệnh cho tôm, cá, Tuyển tập hội thảo
toàn quốc về nghiên cứu và ứng dụng Khoa học công nghệ trong nuôi trồng Thuỷ sản, 2005 ( 22- 23/12- 2004 tại Vũng Tàu), NXBNN.
16. Nguyễn Thị Vân Thái, Bùi Quang Tề, Lê Xuân Thành, Lê Thị Dịu, Vũ văn Vụ (2004), “Nghiên cứu tính kháng khuẩn của nhóm Flavonoids được tách chiết từ Sambucus Chinensis L. Caprifoliaceae”, Tuyển tập hội thảo Toàn
quốc về nghiên cứu và ứng dụng khoa học công nghệ trong nuôi trồng Thuỷ sản, 2005 ( 22- 23/12 – 2004 tại Vũng Tàu ), NXBNN.
17. Nguyễn Thị Thanh Thuỷ, Viện Hải Dương học Nha Trang (2004), “Hiệu quả của chiết cây Cattharanthus roseus L. qua thức ăn đến một số hoạt động miễn dịch không xác định và sức kháng khuẩn Edwardsiella tarda ở cá Chép Rohu giống ( Labeo rohita Hiom)”, Tuyển tập hội thảo Toàn quốc về nghiên
cứu và ứng dụng khoa học công nghệ trong nuôi trồng Thuỷ sản, 2005 ( 22- 23/12 – 2004 tại Vũng Tàu ), NXBNN.
18. Trung tâm nghiên cứu NTTS III, Nha Trang (1991), Bài giảng về bệnh cá tôm.
II. Tài liệu tham khảo tiếng nước ngoài
19. Chuntao Yuan, Dongmei Li, Wei Chen, Fangfang Sun, Guanghong Wu, Yi Gong, janqing Tang, Meifang Shen vaf Xiaodong Han (2007),
Immunological and biochemical prameters in carp(Cyprinus carpio) at Qompsell feed ingridents for long- term adminitration. Aquaculture Research
38(3), 246-255.
20. Kazuyo Nakamura, Kei Yuasa, Somreuk Sinmuk, Kishio Hatai and Naruo Hara (1995), The ubiquinone system in Oomycetes.
21. Kazuyo Nakamura, Miho Nakamura, Kishio Hatai and Zafran (1995),
Lagenidium infection in eggs and larvae of mangrove crab (Scylla serrata) produced in Indonesia.
22. Kishio Haita (1992), Fungal from fish and other aquatic animal, CABI Publishing
23. Kishio Hatai, Gen- Ichi Hoshiai (1993), Characteristics of Two Saprolegnia
species isolated from Coho salmon with Saprolegniosis.
24. Kobori, K., adn Tanabe, T. (1993), Atimicrobial activity of Hinokitiol for
methicillin resistant staphylococus aureus, 1639 – 1642.
25. Le van khoa, Nguyen Thi Ha, Shinpei Wada, Kunika Walita, Kishio Hatai and Kazuo ogawa (2001), Saprolegniasis found medaka in a pound at
Tokyo.
26. LG. Wiloughby DSC (1969) , Fungi and Fish Diseases.
27. Masoomeh Shams- Ghahfarokhi, Mohammad- Reza Shokoohamiri, Nasrin Amirrajab (2006), In vitro antifungal activities of Allium cepa, Allium
sativum, Allium tuberosum and ketoconazole against some pathogenic yeasts and dermatophytes.
28. Mei- Chin Yin , Shih- Tsao (1999), Inhibitory effect of seven Allium plant
upon three Aspergillus.
29. Mortada M.A.Hussein and Kishio Hatai (1999), Saprolegnia salmonis sp.
Nov. isolated from sockeye salmon, Onchrhynchus nerka
30. Mortada M.A.Hussein, Kishio Hatai dan Tetsuichi Nomura (2001),
Saproleniosis in Salmoids and their eggs in Japan.
31. Neish and Hughes (1980), Some biochemical characteristic of the genera
Saprolegnia, Achlya and Aphanomyces isolated from fiches with fungal infection.
32. Nilubol Kitancharoen, Atsushi Ono, Atsushi Yamamoto and Kishio Hatai (1997), The Fungistatic Effect of NaCl on Rainbow trout Saprolegniasis.
33. Nilubol Kitancharoen, Atsushi Yamalmoto and Kishio Hatai (1997),
Fungicidal effect of hydrogen peroxide on fungal in fection of rainbow trout eggs.
34. R.J.Roberts, Rwootten (1999), Fish Diseases.
35. Rechenback- klinke (1966), Some biochemmical characteristic of the genera
Saprolegnia, Achlya and Aphanomyces isolate from fishes with fungal infection.
36. Robell, Yuasa, Kitancharoen (1996), Effect of pH and temperature on
growth of Saprolegnia diclina and S. parasitica isolated from fishes with fungal infection.
37. Sivaram.V, M.M.Bbu, G.Immanuel, S.Murugadass, T.Citarasu and M.P.Marian (2004), Growth and immune response of junevile greasy
groupers (Epinephelustauvina) fed with herbal antibacterial active princile supplemented diets against vibrio harveyi infections.
38. Suruki (1960), Relational of the genera Saprolegnia, Achlya and
39. The aquatic animal heath research institute Department of Fisheries- Bangkok (1995), Fish parasite and Diseases.
40. Vasudeva Rao.Y, M.Romesh, A.Singh and Chakarabarti (2004),
Potentiation of antibody production in Indian major carp Labeo rohita, rohu, by Achiranthes aspera as a herbal feed ingredient.
III. Tài liệu từ Internet
41. Đoàn Giang (2008), Nghiên cứu khả năng kháng nấm của dịch chiết lá trầu,
http://thvm.vn/news.
42. Dùng thảo mộc chữa bệnh cho tôm cá, http://nhanong.net, Sea107- 27/11/2007, NNVN (2007)
43. Hẹ, Bách khoa toàn thư, http://vi.wikipedia.org.
44. Hẹ, Y học cổ truyền, http:// www.Iric-hueuni.edu.vn.
45. Huỳnh Bích Thảo(2004), Trị bệnh cá bằng thuốc nam, http://Agriviet.com. 46. Không được sử dụng Malachite Green, Báo nông thôn ngày nay,
http://vnkhktnn.Vietnamgateway.
47. Thị trường thuỷ sản thế giới và hướng mở rộng xuất khẩu của Việt Nam- Theo tạp chí Thương Mại, http:// www.smenet.com.vn
48. Tổng cục thống kê , http://www.gso.gov.vn
PHỤ LỤC
Phụ lục 1. Tình hình cơ bản của cơ sở nghiên cứu 1. Giới thiệu chung về viện NCNNTS I
Viện NCNTTS I là một tổ chức sự nghiệp thuộc Bộ thuỷ sản có chức năng nghiên cứu khoa học và công nghệ thuỷ sản bao gồm: nghiên cứu các vấn đề về giống, môi trường, bệnh ĐVTS, bảo vệ và phát triển nguồn lợi thuỷ sản nội địa và ven biển, công nghệ sau thu hoạch, nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật và công nghệ mới vào sản xuất.
Phạm vi hoạt động: Từ miền Bắc đến Thừa THiên Huế. Có 8 trạm vùng đặt tại các tỉnh Hải phòng, Hải Dương, Nam Định, Nghệ An, Quảng Bình, Huế, Sơn La, Tuyên Quang.
Gồm 13 phòng ban trong đó có Trung tâm Quan trắc cảnh báo Môi trường và bệnh thuỷ sản các tỉnh khu vực phía Bắc.
2. Trung tâm Quan trắc cảnh báo Môi trường và bệnh thuỷ sản khu vực phía Bắc
Trung tâm trực thuộc Viện NCNTTS I được thành lập trên cơ sở phòng nghiên cứu môi trường và phòng bệnh thuỷ sản có chức năng quan trắc môi trường và dịch bệnh cho các tỉnh phía Bắc.
2.1. Chức năng và nhiệm vụ
- Nghiên cứu các ác nhân gây bệnh và các biện pháp phòng trị bệnh cho ĐVTS nuôi trồng.
- Xây dựng mạng lưới quan trắc và cảnh báo môi trường dịch bệnh phục vụ cho phát triển NTTS bền vững khu vực miền Bắc.
- Xây dựng hệ thống cơ sở dữ liệu chất lượng môi trường nước phục vụ NTTS khu vực miền Bắc.
- Phối hợp và trao đổi thông tin với các cơ quan chức năng có liên quan đến môi trường thuỷ sản, nghiên cứu các biện pháp phòng trị và xử lý khi có dịch bệnh xuất hiện.
- Tư vấn và thực hiện các hoạt ddoongj dịch vụ trong các lĩnh vực môi trường và dịch bệnh thuỷ sản.
- Nghiên cứu môi trường phục vụ sản xuất nội địa và ven biển.
- Hoàn thiện tổ chức, cơ chế điều hành, phối hợp hoạt động giữa trung tâm , trạm vùng và các điểm đo mạng quan trắc.
- Thu thập, cung cấp số liệu cho các cơ quan chức năng có liên quan làm cơ sở cho quy hoạch phân vùng nuôi trồng, phân vùng sinh thái khu vực miền Bắc.
- Hợp tác nghiên cứu, đào tạo và chuiyển giao công nghệ xử lý môi trường, phòng trừ dịch bệnh, sinh thái thuỷ sinh với các tổ chức trong nước và nước ngoài.
2.2. Tổ chức
- Ban điều hành gồm một giám đốc, không quá 2 phó giám đốc. - Các phòng chuyên môn gồm:
+ Phòng môi trường
+ Phòng bệnh thuỷ sản: Phòng vi khuẩn-nấm, phòng ký sinh trùng, phòng PCR, phòng mô.
+ Phòng tổng hợp thông tin.
+ Văn phòng trung tâm, phòng hành chính, phòng kế hoạch, phòng tổ chức. - Nhân sự gồm 36 cán bộ công nhân viên trong đó có 1 tiến sỹ, 8 thạc sỹ, 4 kỹ sư và 1 trung cấp.
2.3. Tình hình hiện nay
- Hiện nay phòng bệnh đang tiếp tục triển khai nghên cứu dự án Fibozopa, nghiên cứu ký sinh trùng chủ yếu là sán trên một số đối tượng như cá trôi Ấn Độ, cá chép, cá mè trắng,…
- Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất vacxin phòng bệnh vi khuẩn cho cá Song (Epinêphlus spp) nuôi lồng tại Hải Phòng và Quảng Ninh trong khuôn khổ dự án Norad.
- Nghiên cứu sản xuất thuốc Becano chiết xuất từ tỏi trị bệnh đốm đỏ cho cá trắm cỏ.
- Tiến hành cảnh báo môi trường và dịch bệnh tại các khu vực nuôi tôm tại 5 địa điểm đưa ra quan trắc: Nghệ An, Thanh Hoá, Hà Tĩnh, Nam Định, Quảng Ninh. Đồng thời gửi những báo cáo cùng với khuyến nghị kịp thời tới sở thuỷ sản các tỉnh, chủ nhiệm hợp tác xã, chủ hộ các ao đầm thu mẫu.
- Xây dựng hoàn thành trang Wed của trung tâm có chức năng cảnh báo môi trường dịch bệnh cho các tỉnh phía Bắc.
2.4. Thuận lợi và khó khăn
- Trung tâm với đội ngũ cán bộ trẻ, năng động có trình độ chuyên môn cao. - Trang thiết bị phục vụ nghiên cứu được đầu tư hiện đại.
- Có được sự hồ trợ về kinh phí cũng như chuyên môn từ các dự án lớn như dự án Norad của Nauy, Fibozopa của Đan Mạch.