- Pha vacxin
d/ Hoàn thiện sản phẩm
4.2.2. Xác ựịnh liều gây nhiễm thắch hợp của virus dịch tả vịt chủng C trên môi trường nuôi cấy tế bào
trên môi trường nuôi cấy tế bào
để xác ựịnh liều gây nhiễm tối ưu của virus giống trên môi trường nuôi cấy tế bào, chúng tôi tiến hành pha loãng giống thành các nồng ựộ 10-3, 10-4 và 10-5 tương ựương với 104, 103 và 102 TCID50 (hiệu giá virus giống là 107,9TCID50/ ml) sau ựó gây nhiễm vào các chai tế bào ựã phát triển ựẹp. Hàng ngày kiểm tra bệnh tắch tế bàọ Những chai có bệnh tắch hoàn toàn
(CPE 100%) ựược lấy mẫu và chuẩn ựộ hiệu giá virus. Trong thắ nghiệm
này chúng tôi bố trắ thành 3 lô (tương ứng với 3 liều gây nhiễm), tiến hành trong cùng ựiều kiện ựể so sánh và ựánh giá sự phá hủy tế bàọ Ở lô ựối chứng sử dụng 5 chai không gây nhiễm virus.
Kết quả ựược trình bày trên bảng 4.9.
Bảng 4.9: Kết quả xác ựịnh liều gây nhiễm thắch hợp của virus dịch tả vịt chủng C trên môi trường nuôi cấy tế bào
Lô TN
Nội dung Lô I Lô II Lô III Lô đ/c
Số chai TN 5 5 5 5
Nồng ựộ pha
loãng virus 10
-5
10-4 10-3 0
Liều gây nhiễm 102 TCID50 103 TCID50 104 TCID50 0
Thời gian bắt ựầu
có CPE (giờ) 48 48 24 Thời gian có CPE 100% (giờ) 120 72 72 Tế bào vẫn nguyên vẹn, không có CPE Hiệu giá virus
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 59
Qua bảng 4.9 cho thấy: ở các nồng ựộ pha loãng virus khác nhau tương ựương với các liều gây nhiễm khác nhau thì thời gian xuất hiện bệnh tắch tế bào và bị phá hủy hoàn toàn (CPE 100%) cũng khác nhaụ
Ở nồng ựộ pha loãng virus 10-5 (tương ựương với liều gây nhiễm 102TCID50) thì sau 48 giờ bắt ựầu xuất hiện bệnh tắch tế bào và tế bào bị phá hủy hoàn toàn sau 120 giờ gây nhiễm virus. Sau 120 giờ gây nhiễm, môi trường dinh dưỡng ựã bị chuyển màu do nuôi thời gian dàị
Với nồng ựộ pha loãng virus 10-4 (tương ựương với liều gây nhiễm 103TCID50) cũng thì sau 48 giờ bắt ựầu xuất hiện bệnh tắch tế bào nhưng thời gian tế bào bị phá hủy hoàn toàn ựã rút ngắn xuống 72 giờ. Ở thời ựiểm này bệnh tắch tế bào rõ rệt, môi trường nuôi cấy còn chất dinh dưỡng, chưa chuyển màụ
Nồng ựộ pha loãng virus 10-3 (tương ựương với liều gây nhiễm 104TCID50) bệnh tắch tế bào xuất hiện sớm nhất là 24 giờ sau khi gây nhiễm virus và ựến 72 giờ tế bào bị phá hủy hoàn toàn.
Huyễn dịch virus thu ựược ở các nồng ựộ pha loãng sau khi gây nhiễm virus (thu hoạch ở thời ựiểm có CPE 100%) ựược chuẩn ựộ xác ựịnh hiệu giá virus. Hiệu giá virus thu ựược cho thấy ở nồng ựộ pha loãng 10-4 cho hiệu giá virus cao nhất (106,9TCID50/ 0,1 ml) và thấp nhất ở nồng ựộ pha loãng 10-5 (hiệu giá ựạt 106,5TCID50/ 0,1 ml). Hiệu giá virus tương ứng với 3 liều gây nhiễm ựược thể hiện trên hình 4.5.
điều này có thể lý giải như sau: ở nồng ựộ pha loãng virus càng thấp thì lượng virus càng nhiều, do vậy virus sinh trưởng và phát triển nhanh chóng và gây bệnh tắch tế bàọ Khi lượng virus trong tế bào nhân lên tới ựỉnh cao nó sẽ phá hủy các tế bào ựể xâm nhập sang các tế bào khác. Nhưng khi lượng virus quá nhiều mà lượng tế bào nuôi lại hết thì virus sẽ bị chết.
Hiệu giá virus của huyễn dịch virus tương ứng với các liều gây nhiễm ựược thể hiện ở biểu ựồ 4.5.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 60 LogTCID50 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9
100TCID50 1,000TCID50 10,000TCID50
Liều gây nhiễm
Hình 4.5: Hiệu giá virus dịch tả vịt của các liều gây nhiễm
Ở lô ựối chứng: các chai ựối chứng không gây nhiễm virus, theo dõi ựến 120 giờ, tế bào vẫn nguyên vẹn, nhưng ựã có tế bào già bong ra khỏi thành chai nuôị Tuy nhiên, tế bào vẫn phủ kắn diện tắch mặt nuôị
Từ những kết quả nghiên cứu trên chúng tôi rút ra kết luận: Liều gây