- Pha vacxin
d/ Hoàn thiện sản phẩm
4.2.3. Xác ựịnh thời ựiểm thắch hợp ựể thu hoạch huyễn dịch sau khi gây nhiễm virus dịch tả vịt chủng C
là 103 TCID50/ ml (tương ựương với nồng ựộ pha loãng virus giống gốc là 10-4).
4.2.3. Xác ựịnh thời ựiểm thắch hợp ựể thu hoạch huyễn dịch sau khi gây nhiễm virus dịch tả vịt chủng C nhiễm virus dịch tả vịt chủng C
Việc xác ựịnh thời ựiểm thắch hợp ựể thu hoạch huyễn dịch virus sau khi gây nhiễm ựể có ựược hàm lượng virus trong huyễn dịch là cao nhất, là yêu cầu cần thiết trong sản xuất vacxin.
Với 3 lô thắ nghiệm, mỗi lô gây nhiễm 10 chai tế bào nuôi cấy sau 48 giờ ựạt tiêu chuẩn với liều gây nhiễm là 103 TCID50/ ml. Sau khi gây nhiễm, hàng ngày quan sát bệnh tắch tế bào bằng kắnh hiển vi quang học. Tại các thời ựiểm 24 giờ, 48 giờ và 72 giờ sau khi gây nhiễm, ựều lấy một chai thu hoạch ựể chuẩn ựộ hiệu giá virus.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 61
Bảng 4.10: Kết quả xác ựịnh thời ựiểm thắch hợp ựể thu hoạch huyễn dịch virus
Hiệu giá virus (TCID50/ 0,1 ml) Lô TN Số lượng chai tế bào Liều gây nhiễm 24h 48h 72h I 10 103TCID50 103,1 106,9 107,1 II 10 103TCID50 103,5 106,7 106,9 III 10 103TCID50 102,9 107,1 106,9
Hiệu giá virus trung bình
(TCID50/ 0,1 ml) 10
3,2
106,9 107,0
Từ kết quả bảng 4.10 cho thấy: với cùng một liều gây nhiễm (103TCID50/ ml), ở thời ựiểm 24 giờ sau gây nhiễm hiệu giá virus rất thấp, biến ựộng từ 102,9 TCID50/ 0,1 ml ựến 103,5 TCID50/ 0,1 ml (hiệu giá virus trung bình là 103,2 TCID50/ 0,1 ml).
Ở thời ựiểm 48 Ờ 72 giờ sau khi gây nhiễm, hiệu giá virus là tương ựương nhau, biến ựộng từ 106,7 Ờ 107,1 TCID50/ 0,1 ml tương ựương với hiệu giá virus giống gốc. Cũng tại thời ựiểm này, các chai tế bào ựều có CPE từ 80 Ờ 100%.
Kết quả này của chúng tôi phù hợp với nghiên cứu của tác giả Mondal B (2010) [38], sau 48 giờ nuôi cấy virus dịch tả vịt trên môi trường tế bào phôi vịt, chuẩn ựộ hiệu giá của huyễn dịch virus ựạt mức cao nhất là 106,8TCID50/ml.
để minh hoạ những kết quả ựược rõ, chúng tôi ựã biểu diễn hiệu giá virus của huyễn dịch thu ựược ở các thời ựiểm sau khi gây nhiễm virus trên môi trường nuôi cấy tế bào trên hình 4.6.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 62 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Log TCID50
24 giờ 48 giờ 72 giờ
Thời gian sau gây nhiễm
Lô TN 1 Lô TN 2 Lô TN 3
Hình 4.6: Hiệu giá virus tại các thời ựiểm sau khi gây nhiễm virus dịch tả vịt chủng C trên môi trường nuôi cấy tế bào
Qua hình 4.6 cho thấy: Hiệu giá virus của huyễn dịch thu hoạch vào thời ựiểm 48 Ờ 72 giờ của các lô tế bào thắ nghiệm ựạt mức cao nhất có nghĩa rằng ở thời ựiểm ựó hàm lượng virus nhân lên và phá hủy tế bào ựạt mức cao nhất.
Vậy, chúng tôi ựã xác ựịnh thời gian thu hoạch huyễn dịch virus tế bào ựể sản xuất vacxin là 48 Ờ 72 giờ sau khi gây nhiễm. Ở thời ựiểm này môi trường còn chất dinh dưỡng, bệnh lý tế bào ựạt ở mức cao, hàm lượng virus là cao nhất. Thu hoạch huyễn dịch virus ở thời ựiểm này ựảm bảo cho chất lượng của vacxin thành phẩm.