CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.3.1. Chọn hệ đệm khóa phiến
Để xác định loại đệm dùng khóa phiến thích hợp tham gia vào phản ứng ELISA định lượng ovalbumin, đã sử dụng hai loại đệm khác nhau là: BSA 1% và Casein 1%. Nồng độ kháng thể phủ phiến là 1/1000, kháng nguyên ở cột đầu tiên của phiến có nồng độ là 20 µg/ml pha loãng bậc hai từ cột 2 đến cột 11.
Kết quả thể hiện ở hình 3.4.
Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn sự phù hợp giữa các đệm khóa phiến trong phản ứng ELISA định lượng ovalbumin.
Từ đồ thị hình 3.4 ta thấy, đệm Casein là đệm thích hợp nhất cho phản ứng ELISA vì có mật độ quang cao nhất là 1,557± 0,060, đồng thời thể hiện sự tuyến tính giữa mật độ quang và nồng độ kháng nguyên nên phù hợp với điều kiện phản ứng.
Đối với đệm là BSA, mật độ quang nền rất cao 0,742±0,034, nên không phù hợp với điều kiện phản ứng.
Mật độ quang nền khi khóa phiến bằng BSA cao có thể do BSA và ovalbumin là hai protein đều thuộc nhóm albumin nên BSA có thể có cấu trúc tương tự như ovalbumin. Khi cho kháng thể đơn dòng kháng ovalbumin vào phản ứng KN-KT xảy ra, một số kháng thể gắn vào BSA. Chính vì vậy nên có hiện tượng gắn giả làm cho
mật độ quang nền cao (0,742±0,034). Điều này không phù hợp khi thực hiện phản ứng ELISA.
Đối với đệm là Casein, đây là một protein trong sữa, không thuộc nhóm albumin nên cấu trúc của protein này hoàn toàn khác với ovalbumin. Có thể vì lí do này mà casein không liên kết với kháng thể đơn dòng kháng ovalbumin. Do đó mật độ quang nền thấp (0,078±0,014), phù hợp với phản ứng ELISA.
Như vậy, với hai hệ đệm là BSA và casein dùng để khóa phiến thì Casein phù hợp cho phản ứng ELISA định lượng ovalbumin. Chính vì thế, hệ đệm casein 1% đã được dùng cho các thử nghiệm tiếp theo.