Từng phản ứng PCR được tiến hành với thành phần hóa chất như bảng 3.1, quy
trình nhiệt như bảng 3.2. DNA template của mỗi phản ứng được tách chiết từ thịt tươi
đã biết trước, primer theo Matsunaga & ctv (1999). Kết quả thu được là mỗi giếng có một band sản phẩm PCR chuyên biệt cho từng loài heo, cừu, bò, gà, dê có kích thước tương ứng 398 bp, 331 bp, 274 bp, 227 bp, 157 bp (Hình 4.1).
Hình 4.1: Sản phẩm PCR riêng lẻ của heo, cừu, bò, gà, dê
Cytochrome b của bò và trâu có sự tương đồng cao vì thế chúng tôi đã dùng cặp primer FSIM, RCB phát hiện thịt bò của Matsunaga và ctv (1999) để phát hiện thịt trâu. Nồng độ primer FSIM:RCB sử dụng là 12:7. Kết quả cho thấy cặp primer FSIM, RCB có thể phát hiện cả thịt bò lẫn thịt trâu (Hình 4.2). Jain và ctv (2007) cũng đã sử dụng cặp primer FSIM&RCB để phát hiện thịt trâu. Kết quả thu được sản phẩm khuếch đại DNA từ thịt trâu cũng có kích thước 274bp.
Heo cừu bò lad gà dê
100 bp 500 bp
Hình 4.2: Sản phẩm PCR của thịt bò và trâu
Mục tiêu của thí nghiệm này là xác định quy trình PCR để phát hiện từng loại thịt tươi riêng biệt. Từ kết quả ở hình 4.1 và hình 4.2 cho thấy thành phần hóa chất và quy trình nhiệt ở bảng 3.1, bảng 3.2 là phù hợp. Nồng độ FSIM là 12 pmol/30μl và các reverse primer RG, RCh, RCB, RS, RP lần lượt là 7, 7, 7, 5, 25 pmol/30μl. Trong đó, RCB được sử dụng chung để phát hiện thịt bò lẫn thịt trâu
Phương pháp PCR được ứng dụng trong nhiều nghiên cứu phát hiện nguồn gốc loài của các loại thịt. Các primer FSIM, RG, RCh, RCB, RS, RP cũng được sử dụng ở nhiều nghiên cứu. Ví dụ, Pinto & ctv (2005) đã sử dụng primer FSIM, RP để phát hiện thịt heo trong xúc xích tươi. Năm 2007, Irfan sử dụng cặp primer FSIM, RG để phát hiện thịt dê. Jain & ctv (2007) sử dụng FSIM, RG, RCh, RCB, RS, RP để phát hiện thịt dê, gà, trâu/ bò, cừu, heo.
Như vậy, các primer của Matsunaga và ctv (1999) gồm FSIM, RG, RCh, RP, RS, RCB thích hợp cho việc phát hiện các loại thịt dê, gà, heo, cừu, trâu lẫn bò.