¾ Điều kiện sắc kí:
- Cột: Gemini C18, 250 x 4,6 mm, kích thước hạt 5 µm. - Detector UV: 254 nm.
- Thể tích tiêm; 20 µm.
- Pha động: Acetonitril và H3PO4 0,1% (60 : 40) chạy theo phương trình Isocratic
¾ Cách thử
Cân chính xác khoảng 0,5 g bột giá đậu nành đã sấy khô cho vào bình nón dung tích 200 mL. Thêm vào 30 mL nước cất và 10 mL dung dịch HCl 3M.
Đun cách thủy với thời gian 2 giờ. Lấy ra, để nguội sau đó chuyển vào bình lắng gạn, cho vào 30 mL ethyl ether, lắc kỹ, để thật lắng, lấy dịch ether, chiết lại 2 lần mỗi lần 20 mL ethyl ether. Gộp dịch chiết lại rồi cho bốc hơi ethyl ether. Thêm vào chính xác 20 mL methanol, khuấy đều.
¾ Các dung dịch đối chiếu:
Dùng methanol pha loãng dung dịch Daidzein đến khoảng 8 µm/mL. Dùng methanol pha loãng dung dịch genistein đến nồng độ 25 µm/mL. Phân tích dung dịch thử, 2 dung dịch đối chiếu trên máy sắc ký lỏng. Hàm lượng % daidzein, genistein trong chế phẩm theo công thức: X(%) = (At / Ac) x Cc x D x 10-6 x (100/Mt)
Trong đó:
- At và Ac: Diện tích đỉnh của mẫu thử và mẫu chuẩn.
- Cc: Nồng độ của Daidzein, Genistein trong dung dịch chuẩn (µm/mL) - D: Độ pha loãng của mẫu thử (20 lần)
- Mt: Khối lượng cân của mẫu thử (g)
Hàm lượng daidzein và genistein trong giá đậu nành tươi được tính:
Hàm lượng daidzein, genistein = 100
513 , 3 100 5 , 0 × × × X mg Trong đó:
- X: Hàm lượng daidzein, genistein trong mẫu thử - 3,513: g giá tươi để cho ra 0,5g bột mẫu.