3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 3.1.1 Thời gian nghiên cứu: 3.1.1 Thời gian nghiên cứu:
Thời gian từ tháng 2 đến tháng 7 năm 2008.
3.1.2 Địa điểm thực hiện: Trại sản xuất giống hải sản Đông Minh – Tiền Hải – Thái Bình Hải – Thái Bình
3.2. Đối t−ợng nghiên cứu
ấu trùng ngao Bến Tre (Meretrix lyrata Sowerby, 1851) giai đoạn từ ấu trùng chữ D đến giai đoạn cuối Umbo .
3.3. Vật liệu nghiên cứu
- Ngao bố mẹ thu mua tại Đông Minh – Tiền Hải – Thái Bình
- Thức ăn: Gồm các loài tảo đơn bào nh− Nanochropsis sp, Chaetoceros. - Hệ thống bể xi măng cho đẻ. Hệ thống xô có V= 100lít dùng bố trí thí nghiệm về độ muối, can nhựa 5l dùng để bố trí thí nghiệm về nhiệt độ.
- Hệ thống bể lọc, hệ thống bể chứa, hệ thống máy nén khí, máy bơm n−ớc. - Dụng cụ phân tích mẫu: Buồng đếm tảo,đếm luân trùng, trắc vi thị kính, pipet, kính hiển vi có gắn th−ớc chia vạch, kính hiển vi có gắn máy ảnh kỹ thuật số... - Dụng cụ đo các yếu tố môi tr−ờng: Máy đo pH, Oxi, nhiệt kế, khúc xạ kế….
- Để tạo độ muối cần thiết cho thí nghiệm : Dùng n−ớc ngọt, n−ớc biển 30%0 n−ớc chạt (150-170%o) để điều chỉnh độ muối mình cần dùng.
Độ muối pha theo công thức đ−ờng chéo sau : C1 C2- C C C2 C1- C Trong đó: C: Độ muối cần pha C1: Độ muối n−ớc ngọt C : Độ muối n−ớc chạt
3.4. Ph−ơng pháp bố trí thí nghiệm
3.4.1 Thí nghiệm nghiên cứu ảnh h−ởng của độ muối
- Bố trí thí nghiệm với độ muối từ 10%0 đến 30%0 chia thành 5 công thức, mỗi công thức cách nhau 5%0, đ−ợc lặp lại ba lần. Các yếu tố phi thí nghiệm đ−ợc khống chế hoàn toàn giống nhau.
Ban đầu ấu trùng đ−ợc đ−a vào các xô có độ muối gốc là 28‰. Sau đó phải tăng, giảm dần độ muối để đ−a về các mức độ muối t−ơng ứng của các lô thí nghiệm bằng cách:
- Thuần theo ph−ơng pháp bậc thang tăng hoặc giảm, chia làm 2 mức để thuần. Một mức thuần độ muối tăng lên 30, 35‰ và một mức thuần độ muối giảm xuống các mức 25, 20, 10 ‰
- Ph−ơng pháp thuần theo sơ đồ sau:
Độ muối(‰) 10 15 20 25 28 30 35
Thời gian thuần (phút/ ‰) 35 30 25 15 10 25
Sơ đồ thí nghiệm ấu trùng chữ D đến Umbo 10‰ 15‰ 20‰ 25‰ 30‰
- Theo dõi các yếu tố môi tr−ờng. - Tỷ lệ sống. - Tốc độ tăng tr−ởng. L1 L2 L 3 L 1 L2 L 3 L1 L2 L 3 L 1 L 2 L 3 L 2 L 3 L 1 Tìm ra ng−ỡng độ muối thích hợp nhất cho sự phát triển của ấu trùng.
- Mật độ 3 ấu trùng /ml
- Thức ăn: Tảo Chlorella sp, Isochrysis galbana, mật độ 150.000 tb/ml - Thay n−ớc 1 ngày một lần, mỗi lần thay 70% kết hợp cùng thời điểm cho ăn, có sục khí, đáy cát mịn dày 0.5 cm.
3.4.2. Thí nghiệm nghiên cứu ảnh h−ởng của nhiệt độ
- Thí nghiệm bố trí từ 20 đến 35oc chia làm 4thang: thang TI (200c), TII (250c), TIII (300c); và TIV (350c).
- Các bình thí nghiệm đ−ợc đặt trong thùng xốp đ5 ổn định nhiệt theo các thang nhiệt độ thí nghiệm.
- Thí nghiệm đ−ợc bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi công thức đ−ợc lặp lại ba lần, các yếu tố phi thí nghiệm đ−ợc khống chế hoàn toàn giống nhau. Sơ đồ thí nghiệm 200c 250c 300c 350c
- Theo dõi các yếu tố môi tr−ờng. - Tỷ lệ sống.
- Tốc độ tăng tr−ởng.
Tìm ra ng−ỡng nhiệt độ thích hợp nhất cho sự phát triển của ấu trùng.
L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 ấu trùng chữ D đến
- Mật độ 3 ấu trùng /ml
- Thức ăn: Tảo Chlorella sp, Isochrysis galbana. Mật độ150.000 tb/ml theo tỷ lệ 50/50
- Thay n−ớc 1 ngày một lần, mỗi lần thay 70% kết hợp tại thời điểm cho ăn - Chất đáy cát mịn dày 0.5 cm
- Thí nghiệm đ−ợc bố trí trong nhà, nhiệt độ đ−ợc điều chỉnh bằng n−ớc đá và heater điện. Th−ờng xuyên kiểm tra và điều chỉnh nhiệt độ trong các lô thí nghiệm
3.5. Ph−ơng pháp xác định các chỉ tiêu cần theo dõi
3.5.1. Ph−ơng pháp theo dõi tốc độ tăng tr−ởng của ấu trùng
Hai ngày tiến hành thu mẫu 1 lần ở các lô thí nghiệm vào buổi sáng ( 6 h). Mỗi bể thu 3 mẫu, mỗi mẫu đo 30 ấu trùng cho một mẫu bằng trắc vi thị kính trên kính hiển vi có độ phóng đại 40 lần.
-Phần trăm tăng trưởng theo chiều rộng ủược tính theo công thức: Ltbc - Ltbd
L% = x 100% Ltbc
L(%): Là mức độ tăng tr−ởng % theo chiều rộng
Ltbc: Là chiều rộng tính theo (àm) trung bình tại ngày đo cuối cùng Ltbc: Là chiều rộng tính theo (àm) trung bình lúc bố trí thí nghiệm - Tốc độ tăng tr−ởng riêng theo ngày (SGR)
LnRtb2 – LnRtb1
SGRr = x 100% T2 – T1
SGRr: Là tốc độ tăng tr−ởng riêng theo chiều rộng.
Rtb1: Là chiều rộng(àm)trung bình tại thời điểm T1. Rtb2: Là chiều rộng(àm)trung bình tại thời điểm T2
3.5.2. Ph−ơng pháp xác định tỷ lệ sống
Dùng ph−ơng pháp thể tích: định kỳ 2 ngày/ lần sau khi thay n−ớc và vệ sinh bể. Dùng cốc đong và pipet 1 ml để thu mẫu. Mẫu đ−ợc đếm trong 1 ml bằng buồng đếm luân trùng, đếm 3 lần cho một lần lấy mẫu. Kết quả cuối cùng là trung bình của 3 lần đếm. Số l−ợng ấu trùng đ−ợc tính bằng đơn vị con/ ml.
Tỷ lệ sống (TLS%) của ấu trùng đ−ợc xác định theo công thức sau : Số l−ợng ấu trùng tại thời điểm i
TLS(%) = x 100% Số l−ợng ấu trùng ban đầu
3.5.3. Ph−ơng pháp theo dõi thời gian biến thái của ấu trùng chữ D đến ấu trùng Umbo ấu trùng Umbo
Hàng ngày ấu trùng đ−ợc thu và kiểm tra trên kính hiển vi, thời gian biến thái đ−ợc tính từ thời điểm ấu trùng chữ D đến đến giai đoạn cuối Umbo đầu Spat.
3.6. Ph−ơng pháp xử lý số liệu
Số liệu đ−ợc tổng hợp, phân tích, theo ph−ơng pháp thống kê sinh học và bằng phần mềm Excel 5.0.