3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.1 đánh giá ựa dạng nguồn gen trên lúa hiện có tại đBSCL:
3.2.1.1 đánh giá ngoài ựồng
- đánh giá bệnh vàng lùn và lùn xoắn lá trên 28 giống: OM6623, OM6619, OM6684, OM6879, OM6690, OM6609, OM5934, OM5798, OM5677, OM6620, OM5992, OM6683, OM6621, OM6625, OM6874, OM6062, OM6878, JASMINE 85, OM5993, OM5239, OM6616, OM6063, OM6615, OM5756, OM6608, OM2395, OM6064) và OM1490 bằng cách sử dụng khung ựếm ựược làm bằng dây kẽm có chiều dài 1 m2, dùng ựể ựếm số bụi lúa nhiễm vàng lùn, lùn xoắn lá của từng giống trên ruộng. Qui tắc ựếm theo 3 lần lặp lại mỗi lần lặp lại ựặt khung ựếm tại một nơi khác nhau của lô giống, ựếm tổng số bụi bị nhiễm bệnh vàng lùn trên 1 m2 ựó. Sau ựó tắnh tỉ lệ nhiễm bệnh của các giống theo công thức:
Tỷ lệ bệnh% =
Số bụi lúa bị bệnh Tổng số bụi của từng giống
- Dựa vào tỉ lệ nhiễm bệnh ựể phân cấp theo thang ựiểm 9 cấp của IRRI, như sau:
Không có cây nhiễm: Cấp 0 0-10% cây nhiễm: Cấp 1 10-20% cây nhiễm: Cấp 3 20-50% cây nhiễm: Cấp 5 50-70% cây nhiễm: Cấp 7 >70% cây nhiễm: Cấp 9
3.2.1.2 đánh giá kiểu hình và thanh lọc vật liệu qua lây nhiễm rầy nâu nhân tạo
Sau khi ựánh giá ngoài ựồng chọn 21 giống ựể thanh lọc trong nhà lướị để ựánh giá kiểu hình trên các giống và dòng bằng cách thanh lọc rầy ta tiến hành các bước sau:
♦ Chuẩn bị nguồn rầy nâu
- Rầy nâu thu thập ngoài ựồng và ựược nuôi trong nhà lưới bằng thức ăn là lúa Tài Nguyên mùa 30 ựến 40 ngày tuổị
- Nuôi rầy sao cho trứng nở thành rầy cám ựồng thời lúa ựược 1 ựến 2 lá ựể có thể chủng rầy thanh lọc.
Hình 3.2: TN1 Hình 3.3: Lồng nuôi rầy Hình 3.4: Rầy cám
♦ Thanh lọc vật liệu
đánh giá kiểu hình ựối với sự gây hại của rầy nâu ựược tiến hành theo phương pháp ựánh giá hộp mạ của IRRI có chỉnh sữạ
- Chuẩn bị: hộp mạ, khay bùn mịn ựược gạch hàng, mỗi hàng cách nhau khoảng 2cm, hạt giống ựược ngâm, ủ.
Thắ nghiệm ựược bố trắ ngẫu nhiên, ba lần lặp lạị
- Dùng pen cấy hạt lúa vừa nẩy mầm vào khay bùn mịn, mỗi giống cấy một hàng 10 hạt. Trong mỗi lô ựều có bố trắ chuẩn kháng PTB33 và chuẩn nhiễm TN1.
Hình 3.5: Lúa ựược cấy trên khay bùn mịn
- Khay bùn ựược ựậy kắn ựể giúp mầm lúa phát triển ựều ựạt chiều cao khoảng 2cm, cho khay mạ vào hộp mạ.
- Khi mạ 2 lá thả rầy ựồng tuổi 1 ựến tuổi 2 với mật số 4 Ờ 6 con/cây (khoảng 2 Ờ 3 ngày sau cấy).
- Khi giống chuẩn nhiễm TN1 cháy rụi tiến hành ựánh giá sự gây hại của rầy nâu (khoảng 7 Ờ 10 ngày sau khi thả rầy).
đánh giá phản ứng theo thang ựiểm cấp 9 của IRRỊ - Cấp 0: Cây phát triển bình thường, không bị hạị - Cấp 1: Cây phát triển bình thường, lá 1 và 2 bị vàng. - Cấp 3: 10% cây chết, lá 1 và 2 bị vàng nhiềụ
- Cấp 5: 20 ựến 50% cây chết, lá 1, 2, 3 bị vàng nặng.
- Cấp 7: trên 50% cây chết, cây còn lại vàng không phát triển ựược. - Cấp 9: 100% cây chết.
đánh giá chỉ số hại theo cấp hại từng cá thể của mỗi giống Công thức tắnh chỉ số hại:
(ax1)+(bx3)+(cx5)+(dx7)+(ex9) %CSH = --- x 100 n x 9 a : số cây cấp 1. b : số cây cấp 3. c : số cây cấp 5 d : số cây cấp 7. e : số cây cấp 9. n : tổng số cây thử nghiệm
Hình 3.6: Khay lúa trước và sau khi chủng
3.2.1.3 Phân nhóm di truyền:
Phương pháp phân nhóm di truyền các giống theo kiểu hình dựa vào cấp phản ứng và chỉ số hại với sự hỗ trợ của phần mềm NTSYSpc 2.1
