3. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1.3 Vật liệu ựánh giá kiểu gen
Từ kết quả thanh lọc ựánh giá kiểu hình chọn ra một số giống và tổ hợp ựã thanh lọc tiến hành ly trắch DNA ựể phục vụ cho thắ nghiệm ựánh giá kiểu gen.
3.1.3.1. Hóa chất ựể ựánh giá kiểu gen
Hóa chất chiết suất ADN
- Tris- EDTA - Nước cất tiệt trùng - NaCl - SDS - Chloroform: Isopropanol (24:1) - Cồn phân tử 70%, 100%.
- Cồn 75% - TE
Hóa chất kiểm tra chất lượng ADN
ồThành phần hóa chất dùng ựể kiểm tra ADN
Bảng 3.2: Thành phần dung dịch loading buffer 10X
Thành phần Thể tắch Tris 1 M pH=8,0 0.5 g Glycerol 5 ml EDTA 0,5 M Ph=8,0 100 ộl Xylen cyanol 0,2% 15 mg Bromophenol blue 15 mg Nước cất 4.5 ml Tổng cộng 50 ml
Nguồn: Nguyễn Thị Lang, 2002 Cách pha TAE 50X
Bảng 3.3: Thành phần TAE 50X
Thành phần Thể tắch cho 1 lắt
Tris base 2 M 242 g
Glacial acetic acid 57.1 ml
EDTA 0.5 M, Ph=8,0 100 ml
Nguồn: Nguyễn Thị Lang, 2002
+ Dung dịch TAE 1X + Gel agarose 0,9%
+ Dung dịch nhuộm ADN (bromophelnol blue). + Dung dịch nhuộm gel (Ethidium Bromide)
Hóa chất chạy PCR
Hóa chất phân tắch SSR
+ Buffer, chứa Tris - HCl, KCl và MgCl2
+ Bốn deoxynucleotide (dNTPs)
+ Hai oligonucleotide primers
+ ADN
+ Một ADN polymerase
+ Sản phẩm khuyếch ựại bằng SSR ựược ựiện di trên gel agarose 3 % với TBẸ
3.1.3.2. Dụng cụ dùng ựể ựánh giá kiểu gen
Dụng cụ ly trắch ADN
- Máy ly tâm - Cối nghiền
- Ống nghiệm 1,5 ml,2 ml - Các ựầu col vàng và xanh - Dụng cụ ựựng ựá.
Hình 3.1: Bộ dụng cụ ựể chiếc tách ADN
Dụng cụ kiểm tra chất lượng ADN
Dụng cụ làm gel agarose và ựiện di
+Máy chạy ựiện di
+Parafilm
+Microwave (lò vi sóng)
+Khay ựựng gel, lược
+ Máy chụp hình bằng tia UV Dụng cụ chạy PCR + Pipetman + Máy PCR (PTC-100TM) + Máy ựiện di + Tube 0,5 ml
